[发明专利]含Endothelin-1的人类卵母细胞体外成熟培养液和应用

摘要

本发明提供了一种含有Endothelin‑1的人类卵母细胞体外成熟培养液，由A液和B液组成，A液：ET‑1，r‑FSH，体积分数10%SSS；B液：ET‑1，r‑FSH，hCG，体积分数10%SSS，溶剂均为常规基础培养液。本发明通过研究证明该培养液和培养方法具有促进人卵母细胞体外成熟，尤其是胞质成熟的能力，并可提高卵母细胞体外受精后的胚胎发育潜能。本发明是根据人未成熟卵母细胞体外培养时胞质与细胞核发育不平衡影响胚胎体外发育潜能的现状，结合ET‑1在卵丘细胞中的生物学功能和作用研制而成，所述培养液可在体外进行人卵母细胞培养中的应用，有助于优化IVM过程，值得推广应用。

主权项

1.一种含Endothelin‑1的人类卵母细胞体外成熟培养液在进行人卵母细胞培养中的应用：其特征在于，通过以下步骤实现：（1）配制人类卵母细胞体外成熟培养液，A液：ET‑1 100ng/ml，0.075IU/ml r‑FSH，体积分数10%人血清替代物，溶剂为常规基础培养液，B液：ET‑1 100ng/ml，0.075IU/ml r‑FSH，0.5IU/ml hCG，体积分数10%人血清替代物，溶剂为常规基础培养液，常规基础培养液为G‑IVF培养液；（2）将人类卵母细胞体外成熟培养液放置于含6%CO2，37℃，饱和湿度的恒温培养箱中平衡6小时以上；（3）将未成熟卵母细胞‑卵丘复合体在卵母细胞体外成熟培养液A液中漂洗两遍，随后将未成熟卵母细胞‑卵丘复合体转移入新的A液中培养10小时；（4）10小时后，将未成熟卵母细胞‑卵丘复合体转移入B液中漂洗两遍，随后将卵母细胞‑卵丘复合体转移入新的B液中培养14小时；（5）14小时后，将未成熟卵母细胞‑卵丘复合体转移至透明质酸酶溶液中吹打数次，再用剥卵针将卵母细胞周围的卵丘细胞小心剥除；（6）在倒置显微镜下确认明显排出极体的Meiosis II卵母细胞为成熟的卵母细胞，将成熟的卵母细胞使用玻璃吸管小心转移至G‑I培养液中，并置于含6%CO2，37℃，饱和湿度的恒温培养箱中，即完成细胞培养。