[发明专利]一种氧化型辅酶I的制备方法

摘要

本发明公开了一种氧化型辅酶I的制备方法，包括如下步骤破碎酵母细胞和提取NAD+；其中，破碎酵母细胞的具体步骤为将酵母加入盐酸中浸泡后，加热、保温、加冰块冷却至室温，离心得到清液A；搅拌12‑16h，搅拌过程中加入717#树脂，搅拌结束后过滤得到清液B；提取NAD+包括如下步骤酸化，交换，洗脱，去盐，分离，洗脱和收集。本发明能大大增加酵母细胞的破碎率，原料廉价易得，设备简单，操作方便，适合工业化生产。

主权项

一种氧化型辅酶I的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：破碎酵母细胞和提取NAD+；其中，破碎酵母细胞的具体步骤为：将酵母细胞加入浓度为0.01‑0.12mol/l的盐酸中浸泡0.5‑2.5h后，加热至85‑100℃，保温3‑8min，加冰块冷却至室温，离心得到清液A；搅拌12‑16h，搅拌过程中加入717#树脂，搅拌结束后过滤得到清液B，其中酵母细胞和盐酸重量体积比(g/ml)为15‑25：80‑400，酵母细胞和717#树脂的重量比为15‑25：45‑90；其中，提取NAD+的具体步骤为：S1、酸化：向清液B中加入浓度为5‑7mol/l的盐酸调节PH为1.95‑2.05得到溶液C；S2、交换：将S1中得到的溶液C以15‑20ml/min的速度上122#柱，上柱结束后，用蒸馏水以15‑25ml/min的速度洗涤，其中，溶液C与蒸馏水的体积比为1：2‑3；S3、洗脱：调节液面距122#柱上层树脂层4‑5cm，用浓度为0.3‑0.5mol/l的氨水以5‑7ml/min的速度洗脱，当洗脱液pH＝7‑8时，开始收集洗脱液D，其中溶液C的体积与氨水的总体积的比为1：2‑3；S4、去盐：向S3中得到的洗脱液D中加入732#树脂，边加边搅拌，至PH为4.95‑5.05，过滤得滤液，用蒸馏水洗涤树脂得洗液，合并滤液和洗液得到溶液E；S5、分离：用氨水调节S4中得到溶液E至pH为6.5‑7.5，室温放置7‑8天后，以3.5‑5ml/min的速度上717#树脂柱，上柱结束后，用40‑60ml蒸馏水以5‑7ml/min的速度洗涤；S6、洗脱：取浓度为0.08‑0.12mol/l氯化钾溶液50‑70ml，以3.5‑5ml/min的速度洗脱，收集洗脱液，洗脱液以3.5‑5ml/min的速度上769型炭柱，用20‑40ml蒸馏水以5‑7ml/min的速度洗涤后，用混合溶剂以0.5‑1ml/min的速度洗脱NAD+，其中，混合溶剂由醋酸乙酯、丙酮、水和氨水组成；S7、收集：收集洗脱液，用5.7‑6.3mol/l硝酸调节PH至2‑3，立即加入以洗脱液体积份为基准的1‑4倍的冷丙酮静置30‑50min，去上清液，以2000‑4000rpm的速度，离心2‑5min，去上清液，干燥沉淀得到NAD+，其中冷丙酮的温度为‑5至‑15℃。