[发明专利]一种黄霉素A组分的分离纯化方法

摘要

本发明公开了一种黄霉素A组分的分离纯化方法，属于生物化工技术领域，技术方案为首先采用聚甲基丙烯酸酯类大孔吸附树脂对黄霉素发酵液进行预纯化，然后通过阴离子交换树脂脱除溶剂，最后经反相色谱精制，得到黄霉素A组分。本发明方法采用阴离子交换树脂脱除溶剂使得工艺紧凑，采用聚甲基丙烯酸酯类大孔吸附剂预纯化黄霉素A组分的纯度与收率均优于苯乙烯‑二乙烯苯类大孔吸附树脂，且溶剂消耗更少，采用制备级的反相色谱填料的价格便宜而更易工业化推广应用。

主权项

一种黄霉素A组分的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将黄霉素发酵液pH值调节至3.0～4.5，于4℃冷藏过夜，离心，取上清液；2)将上清液以1～3BV/hr的流速连续流过聚甲基丙烯酸酯类大孔吸附树脂层析柱，控制黄霉素A组分的载量为15～30g/L，然后进行梯度洗脱，收集馏分，合并富集黄霉素A组分的洗脱液；所述的梯度洗脱为：依次用2BV去离子水、1BV 20％甲醇水溶液、1BV 40％甲醇水溶液、3BV 60％甲醇水溶液及2BV 80％甲醇水溶液进行洗脱，洗脱流速为1～3BV/hr；3)将富集黄霉素A组分的洗脱液的pH值调节至5.0～8.0，以1～20BV/hr流速连续流过装填有阴离子交换树脂的层析柱，然后进行洗脱，收集脱溶剂后的黄霉素A组分洗脱液；富集黄霉素A组分的洗脱液与阴离子交换树脂的体积比为4～10：1，所述的阴离子交换树脂为带有季胺基或叔胺基的离子交换树脂；所述的洗脱为：依次用2BV去离子水及5BV缓冲溶液进行洗脱，缓冲液的pH值为3.5，缓冲液中含有67mM的KH2PO4及1M的NaCl；洗脱流速为1～20BV/hr；4)将脱溶剂后的黄霉素A组分洗脱液的pH值调节至3.0～4.5，以50～250cm/hr的流速泵入装填有反相色谱填料的层析柱，然后以相同的流速先进行线性梯度洗脱，再进行等梯度洗脱，直至黄霉素A组分完全解吸，合并高纯度黄霉素A组分，去除溶剂后冷冻干燥，得到黄霉素A组分。