[发明专利]一种一次制备多个DNA大片段插入双末端测序文库的方法有效
| 申请号： | 201510430638.3 | 申请日： | 2015-07-21 |
| 公开（公告）号： | CN105002570B | 公开（公告）日： | 2017-09-05 |
| 发明（设计）人： | 常玉晓;赵胜;刘可 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院深圳农业基因组研究所 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 深圳中一专利商标事务所44237 | 代理人： | 张全文 |
| 地址： | 518120 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种一次制备多个DNA大片段插入双末端测序文库的方法，包括以下步骤将待测DNA打断后进行生物素接头标记处理；将生物素标记的DNA片段分选成N个不同大小的DNA片段，其中，10≤N≤12；将所述N个不同大小的DNA片段分别进行环化处理得到环状DNA，然后清除未环化的线性DNA片段，将所述环状DNA打断后连接上带有不同索引序列的Truseq接头；将带有Truseq接头的不同长度的DNA片段混合并与链霉亲和素磁珠反应，富集带有生物素标记的DNA片段；PCR扩增所述带有生物素标记的DNA片段并测序。 | ||
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【主权项】：
一种一次制备多个DNA大片段插入双末端测序文库的方法，包括以下步骤：将待测DNA打断后连接上带有生物素的DNA接头，得到生物素标记的DNA片段；将所述生物素标记的DNA片段分选成N个不同大小的DNA片段，其中，10≤N≤12，所述将待测DNA打断的步骤中，采用Tn5转座酶复合体将待测DNA打断并加上带有生物素修饰的DNA接头，且所述Tn5转座酶复合体和所述待测DNA的比例为3‑5.5μL Tn5转座酶复合体：1μg待测基因组DNA；将所述N个不同大小的DNA片段分别进行环化处理得到环状DNA；然后清除未环化的线性DNA片段；将所述环状DNA打断后连接上带有不同barcode的Truseq接头，得到含有不同Truseq barcode接头的DNA片段；将所述带有Truseq barcode接头的DNA片段混合，并与链霉亲和素磁珠反应，富集带有生物素标记的DNA片段；PCR扩增所述带有生物素标记的DNA片段并测序。
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