[发明专利]一株表达角蛋白酶的重组毕赤酵母及其应用有效
| 申请号： | 201510432148.7 | 申请日： | 2015-07-21 |
| 公开（公告）号： | CN105018365B | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 张娟;陈坚;李光磊;堵国成;方真 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N9/60;C12R1/84 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一株表达角蛋白酶的重组毕赤酵母及其应用，属于基因工程领域。本发明以毕赤酵母SMD1168为宿主，以pPIC9k为载体，表达了角蛋白酶。本发明所构建的重组菌经发酵培养，168h时细胞干重达到174.1g/L，胞外角蛋白酶酶活达到1156U/mL，更适合工业化生产角蛋白酶。 | ||
| 搜索关键词： | 角蛋白酶 重组毕赤酵母 宿主 基因工程领域 蛋白酶酶活 毕赤酵母 发酵培养 重组菌 干重 构建 外角 应用 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种重组毕赤酵母发酵生产角蛋白酶的方法，其特征在于，是将重组菌的种子培养液，按接种量12‑13％接种到装液量25‑30％的3L全自动发酵罐中，以50％氨水和磷酸溶液控制pH 5.5，温度30℃，调节搅拌转速为500rpm，通气量维持在2vvm；当甘油耗尽，开始以指数流加方式流加350mL的含12mL/L PTM1的50g/L的甘油，维持比生长速率在0.18h‑1，并逐渐将搅拌转速调节到1000rpm，通气量调节到4vvm；待甘油再次耗尽，继续保持体系中基质匮乏状态1h且DO>60％后，开始流加100％甲醇诱导产酶，以反馈流加的方式维持培养基中的甲醇的体积浓度在1.8％；所述重组菌为以毕赤酵母SMD1168为宿主，以pPIC9k为载体，表达了角蛋白酶；编码所述角蛋白酶的基因的序列如SEQ ID NO.1所示。
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