[发明专利]一种新型群体感应抑制剂的分离提取、结构鉴定及其应用

摘要

本发明涉及一种由水莱茵海默氏菌QSI02（Rheinheimera aquimaris QSI02）中分离提取的具有群体感应淬灭活性的化合物及其应用。本发明是通过对海洋污泥来源的水莱茵海默氏菌QSI02（Rheinheimera aquimaris QSI02）进行发酵培养、分离纯化得到一种具有抑制紫色杆菌和铜绿假单胞菌群体感应系统活性的环二肽类单体化合物，其化学名称为环（L‑色氨酸‑L‑丝氨酸）。与传统抗菌药物的作用机制相比，本发明筛选到的活性化合物作用于一种新颖的抗菌靶点，只干扰细菌群体感应调控的致病行为，不影响细菌自身的生长，因此理论上不会产生细菌耐药性；化合物本身及其衍生物可以作为先导化合物指导开发新型抗菌药物应用于临床研究、农业生产等领域，对人类健康和农业发展具有重大的意义。

主权项

一种式Ⅰ化合物的制备方法，所述方法包括如下步骤：(1)发酵生产：海洋污泥来源水莱茵海默氏菌QSI02的发酵培养：按培养微生物的常规方法，取水莱茵海默氏菌QSI02适量，所述水莱茵海默氏菌QSI02的保藏编号是CCTCCNO:M2015245，接种到LB液体培养基中，震荡培养12h，温度28℃、转速160rmp，所述LB液体培养基为：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl 10g/L，去离子水1L，121℃，灭菌20分钟；取上述培养12h的水莱茵海默氏菌QSI02接种到装有2.5L海水培养基的5L锥形瓶中，接种量为4％，震荡培养24h，温度28℃、转速160rmp，获得发酵培养物；所述海水培养基为：蛋白胨5g/L，酵母提取物2g/L，磷酸高铁0.1g/L，0.22μm微孔滤膜过滤的海水lL，121℃，灭菌20分钟；(2)浸膏的获得：上述发酵培养物用大型离心机将菌体离掉，并收集发酵液；然后将发酵液真空低温浓缩至膏状，用甲醇从膏状发酵物中浸提，真空浓缩得到粗提物浸膏，‑4℃保存备用；(3)化合物的分离纯化：将上述获得的粗提物浸膏用甲醇溶解，再用0.22μm有机相滤膜过滤，采用紫外检测器UV‑900与凝胶柱层析Sephadex LH20串联，以甲醇作为洗脱剂，根据254nm处紫外检测器检测结果洗脱分离为5个流份，对流份采用群体感应筛选模型进行活性检测，其中第4个活性洗脱流份再经过薄层层析制备，展开剂为水:正丁醇:乙酸乙酯＝1:3:1，分离纯化得到式Ⅰ化合物。