[发明专利]一种高效分泌表达转肽酶SortaseA的方法

摘要

本发明公开了一种高效分泌表达转肽酶Sortase A的方法，属于基因工程领域。本发明成功实现了利用诱导时添加甘氨酸的添加策略在重组大肠菌BL21(DE3)中胞外高效生产转肽酶Sortase A，解决了目前转肽酶Sortase A分泌效率低，发酵周期长的问题。本发明通过对目的蛋白载体以及发酵体系中添加剂和添加策略的优化，表明pET‑22b载体是适合Sortase A胞外生产的载体，采取两阶段添加甘氨酸(阶段一诱导时添加终浓度为0.5％的甘氨酸；阶段二诱导后6小时添加2％的甘氨酸)可以极大地提高大肠杆菌胞外生产Sortase A的水平。该发明第一次实现了Sortase A在大肠杆菌中的胞外高效生产，为后续Sortase A的工业化生产奠定了基础。

主权项

一种应用重组大肠杆菌高效分泌表达转肽酶Sortase A的方法，其特征在于，包括以下步骤：活化重组大肠杆菌得到种子，按2％的接种量将培养好的种子接入发酵培养基装液量为10％的摇瓶，37℃、250rpm条件下培养至OD600＝0.6之后，添加终浓度为1mM的IPTG和0.75％的甘氨酸进行诱导表达，于30℃、250rpm培养，并在诱导6h后添加2％的甘氨酸，总诱导培养时间为48h；所述重组菌大肠杆菌为将来源于金黄色葡萄球菌的去除N端信号肽的srt基因，以pET22b为表达载体，以E.coli BL21(DE3)为宿主构建得到重组菌大肠杆菌。