[发明专利]一种土壤中残留bt蛋白的原位酶联免疫定量检测方法

摘要

本发明公开了一种土壤中残留Bt蛋白的原位酶联免疫定量检测方法，包括以下步骤：1）去除待测土样中的动植物残体，充分研磨，通过50-60目筛子使得土壤粒径在0.2mm以下；2）将研磨后的土样在高压湿热条件下灭菌15-20分钟；3）称取灭菌后的土样1-2g，放入10ml离心管中进行清洗去除土壤杂质；4）对去除过杂质的土壤土样表面进行封闭；5）对封闭后的土壤土样进行抗体结合检测；本发明为监测Bt蛋白在土壤中的残留及其对土壤生态系统的影响提供了一条新的途径，而且本方法不仅仅可以用于土壤bt蛋白的检测，在更换不同的抗体后更可以用于检测各种土壤中的残留蛋白含量。

主权项

一种土壤中残留Bt蛋白的原位酶联免疫定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1）去除待测土样中的动植物残体，充分研磨，通过50‑60目筛子使得土壤粒径在0.2mm以下；2）将研磨后的土样在高压湿热条件下灭菌15‑20分钟；3）称取灭菌后的土样1‑2g，放入10ml离心管中进行清洗去除土壤杂质；4）对去除过杂质的土壤土样表面进行封闭；5）对封闭后的土壤土样进行抗体结合检测：5.1）向封闭后的土样中加入3ml反应液Ⅰ，充分摇匀后，水平置于摇床，室温，50rpm/min，孵育2h，期间每隔20min颠倒离心管数次，之后10000rpm/min离心5min，弃上清液；5.2）加入洗涤液Ⅱ，充分摇匀后，水平置于摇床，室温，100rpm/min，震荡5min；之后10000rpm/min离心5min，弃上清液；5.3）重复步骤5.2）三到五次；5.4）加入3ml反应液Ⅱ，充分摇匀后，水平置于摇床，室温，50rpm/min，孵育1h，期间每隔20min颠倒离心管数次，之后10000rpm/min离心5min，弃上清液；5.5）加入洗涤液Ⅱ，充分摇匀后，水平置于摇床，室温，100rpm/min，震荡5min；之后10000rpm/min离心5min，弃上清液；5.6）重复步骤5.5三到五次；5.7）加入新鲜配置的3ml TMB显色液，充分摇匀后，水平置于摇床，室温，100rpm/min，孵育30min，期间每隔10min颠倒离心管数次，孵育结束后加入2M硫酸1ml终止反应，之后10000rpm/min离心5min，取上清液于酶标仪450nm进行检测。