[发明专利]一种以改性硅藻土为载体的固定化芽胞漆酶及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种固定化芽胞漆酶及其制备方法与应用，属于固定化技术领域和废水处理领域。本发明公开的固定化芽胞漆酶由芽胞杆菌属菌株所产的芽胞漆酶通过酰胺键固定在硅藻土表面或孔隙中得来；其制备过程包含芽胞的制备、硅藻土改性、固定和收集四个步骤，操作简便，酶活回收率高；其结合力强，载体资源丰富，价格低廉，是一种理想的固定化载体。本发明提供的固定化芽胞漆酶可直接用于染料的脱色处理，并且具有较高的可重复利用能力。

主权项

1.一种固定化芽胞漆酶，其特征在于，其以3‑氨丙基三乙氧基硅烷氨基化的硅藻土为载体，通过共价结合和/或物理吸附的作用将具漆酶活力的芽胞固定在硅藻土表面或孔隙中，其中所述硅藻土为Celite 545，其中所述具漆酶活力的芽胞由短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)产生，其由以下步骤制备而成：(1)制备芽胞杆菌属菌株所产的芽胞；(2)改性硅藻土的制备：称取2g硅藻土，浸泡于20－100ml有机溶剂中，再往其中添加1－20ml 3‑氨丙基三乙氧基硅烷，充分混匀，再将其置于50－120℃水浴回流或摇床上旋转振荡2－24h；洗涤，抽滤并收集；(3)共价连接：将制备好的改性硅藻土按20－100mg改性硅藻土:1ml缓冲液分散到pH 5‑8的缓冲液中；往上述混合物中添加碳二亚胺盐酸盐使其终浓度为0.1－2.0mg/ml，并使用超声波振荡5－30min，使其充分分散；往含碳二亚胺盐酸盐的混合液中添加芽胞，使其终浓度为1.0－10.0mg/ml，并用超声波振荡处理10－60min；将经上述处理得到的混合物直接转移至摇床，在4－40℃，50－250r/min条件下处理1－48h；(4)回收：芽胞与改性硅藻土混合物经混合固定化处理后，过滤，用缓冲液冲洗1－5次，分别收集上清液和固定化芽胞，保藏于0－40℃。