[发明专利]毛钩藤的快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种毛钩藤的快速繁殖方法，包括以下步骤步骤一、制作毛钩藤的无菌外植体；步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养；步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养，培养直至生根；步骤四、将生根的毛钩藤苗移栽至基质中培养。本发明通过建立毛钩藤的快速繁殖方法，具有繁殖率高、繁殖速率快等优点，便于在生产上大面积推广种植，满足了中药资源开发的迫切需要。

主权项

一种毛钩藤的快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、制作毛钩藤的无菌外植体，选取毛钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段，摘除多余叶片，用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面，然后剪成2‑4cm长的带腋芽的嫩茎段作为毛钩藤的无菌外植体；步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养，控制温度为24℃～26℃，诱导腋芽形成；所述第一培养基由white培养基、1～1.3mg/L的竹醋液、35g/L的蜜二糖和4g/L的琼脂组成；毛钩藤的无菌外植体在第一培养基中培养时，调节pH为5.7，控制光照强度为1800lx，每天的光照时间为10小时；步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养，控制温度为24℃～26℃，培养直至生根；其中，所述第二培养基包括固态培养基和液态培养基，所述第二培养基放置于培养盒中，使固态培养基在所述液态培养基的上方；从无菌外植体的下方开始，将带有腋芽的无菌外植体的1/5浸没于所述液态培养基，将带有腋芽的无菌外植体的1/3置于所述固态培养基中；毛钩藤的无菌外植体在第二培养基中培养时，调节所述固态培养基的pH为5.7，调节所述液态培养基的pH为5.3，控制光照强度为2000lx，每天的光照时间为12小时；所述固态培养基由white培养基、0.1～0.2mg/L的珍珠粉、0.1～0.5mg/L的激动素KT、0.7～0.8mg/L的吲哚丁酸、4g/L的琼脂和0.1～0.5g/L的活性炭组成；所述液态培养基由B5培养基、0.6～0.9mg/L的竹醋液和0.2～0.4mg/L的火龙果提取液组成；所述火龙果提取液的制作方法为将火龙果果皮破碎，用火龙果果皮质量10倍的50％的乙醇水溶液浸泡7小时，之后在55℃下萃取8小时，过滤，取滤液，将所述滤液真空减压浓缩至6mg/L，设置真空度为0.05～0.06MPa，减压浓缩时控制温度为55℃，即得所述火龙果提取液；在进行所述步骤三之前，还将所得的带腋芽的毛钩藤的无菌外植体进行脉冲电击处理：将带腋芽的毛钩藤的无菌外植体下方的1/3处浸泡于导电液中，控制电压为220v，脉冲频率为380mHz，进行电击处理3‑5s；所述导电液为质量分数为25％的硝酸钾溶液；步骤四、将生根的毛钩藤苗移栽至基质中培养，移栽后在所述基质表面铺设一层聚乙烯缓释膜，所述聚乙烯缓释膜中注入有质量配比为10:1:10:2的硫酸亚铁、有机螯合肽、硼砂和七水硫酸锌；所述基质从下到上由草灰层、细胞分裂剂层、鱼骨层和膨润土层按厚度比为4:1:2:5构成。