[发明专利]口蹄疫病毒O、A和AsiaⅠ型三重实时荧光定量RT‑PCR检测试剂盒

摘要

本发明提供一种口蹄疫病毒O型、A型和Asia Ⅰ型三重实时荧光定量RT‑PCR检测试剂盒。本发明是以口蹄疫病毒2B基因设计口蹄疫病毒O型、A型和Asia Ⅰ型三个血清型的共用反转录引物；再以口蹄疫病毒VP1基因作为扩增靶区域，设计3对口蹄疫病毒型特异性引物和TaqMan MGB探针，采用实时荧光定量RT‑PCR技术，实现对口蹄疫病毒O型、A型和Asia Ⅰ型三个血清型的鉴别检测。本发明提供的检测试剂盒适用于疑似口蹄疫病毒(FMDV)感染家畜的水疱皮、扁桃体、淋巴结等组织样品及水疱液、食道‑咽部分泌液(O‑P液)的病毒核酸检测，灵敏度可达1.0×101拷贝/μL，同易与其混合感染或感染症状相似的其他病原体例如VSV、PRV、CSFV、PRRSV、SS2、GPV、BVDV之间无交叉反应。

主权项

用于口蹄疫病毒O型、A型和AsiaⅠ型三重实时荧光定量RT‑PCR检测的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针包括：O型FMDV检测引物和探针：P1：5'‑GSGCRCTCCTBCGNACK‑3'P2：5'‑YRTGYTTSACWGCYASYTCYARR‑3'Probe‑P7：5'‑FAM‑CYACYTACTAYTTCKCW‑MGB‑3'；A型FMDV检测引物和探针：P3：5'‑CYGAGGCAGCACTGVAM‑3'P4：5'‑CGGYGCYTTGTGGTAAGC‑3'Probe‑P8：5'‑VIC‑CMCGAGCAACCCCA‑MGB‑3'；AsiaⅠ型FMDV检测引物和探针：P5：5'‑AAGAGCACCCAAACCCTTGA‑3'P6：5'‑GCCCCGACCAGTGTGTGT‑3'Probe‑P9：5'‑NED‑CTCATGCAGATCCCCT‑MGB‑3'；以及共用反转录引物P0：5'‑CGGGAAACGCATGAGCAGTA‑3'；其中，S为G，C；R为A，G；B为C，G，T；N为A，C，G，T；K为G，T；Y为C，T；W为A，T；V为A，C，G；M为A，C。