[发明专利]一种葡萄糖酸杆菌属基因无痕敲除体系及应用在审

专利信息
申请号: 201510481704.X 申请日: 2015-08-03
公开(公告)号: CN105018513A 公开(公告)日: 2015-11-04
发明(设计)人: 林建平;袁建锋;朱力;吴绵斌;杨立荣 申请(专利权)人: 浙江大学
主分类号: C12N15/74 分类号: C12N15/74;C12N1/21;C12R1/01
代理公司: 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 代理人: 黄平英
地址: 310027 浙*** 国省代码: 浙江;33
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摘要: 发明公开了一种葡萄糖酸杆菌属基因无痕操作体系及应用,基因无痕敲除体系包括一株野生型葡萄糖酸杆菌属和一个带有SacB基因、抗生素标记和多克隆位点的重组整合型自杀质粒。利用基因无痕敲除体系进行葡萄糖酸杆菌属中基因敲除的方法包括:(1)将待敲除目的基因的上、下游片段引入重组整合型自杀质粒的多可克隆位点,得到自杀型敲除质粒;(2)将所得自杀型敲除质粒转化进野生型葡萄糖酸杆菌属中,依次经抗生素抗性筛选和蔗糖筛选,菌落PCR验证得到目的基因敲除的基因缺陷型菌株。本发明采用SacB基因作为筛选标记,在Gluconobacter中进行基因的无痕操作,是对以upp基因作为筛选标记的一种改良,并且宿主菌无需任何操作,野生型即可,适用范围广,操作安全。
搜索关键词: 一种 葡萄糖 杆菌 基因 无痕敲 体系 应用
【主权项】:
一种葡萄糖酸杆菌属的基因无痕敲除体系,其特征在于,包括一株野生型葡萄糖酸杆菌属(Gluconobacter)菌株和一个带有SacB基因、抗生素标记和多克隆位点的重组整合型自杀质粒。
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