[发明专利]基于核酸适配体检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器及其制备方法

摘要

本发明涉及一种基于核酸适配体检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器及其制备方法，本发明通过Primer的不断产生和循环利用来实现信号的放大，从而实现鼠伤寒沙门氏菌的高灵敏检测，并获得较低的检测下限。本发明制备的生物传感器特异性和灵敏度高、成本低、检测速度快的基于核酸适配体检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器。通过这种检测方法，沙门氏菌检测限在5‑15cfu/mL，检测范围是1×10‑1×107 cfu/mL。

主权项

1.一种基于核酸适配体检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对电极进行预处理，取金电极，在0.3μm和0.05μm的氧化铝浆中进行抛光处理，直到呈镜面，用PBS冲洗和二次水冲洗；(2)将10μM的HAP2取10μL滴加到经过预处理的电极表面，在37℃下孵育2h；(3)将灭菌水，Aptamer、Primer和待测目标物加入离心管中，震荡30s，放入37℃的恒温箱中孵育1h；再将10×的buffer缓冲液、HAP1、Helper、dNTP、聚合酶和内切酶加入以上离心管中，震荡30s，放入37℃的恒温箱中孵育2h；将孵育好的混合溶液滴加到修饰好HAP2层的电极上，将电极继续放在37℃的恒温箱中孵育2h，清洗；(4)以Ag/AgCl为参比电极，以Pt电极为对电极，电位设置为0到‑0.5V，脉冲宽度0.05V，扫描速率为0.06S，采用差分脉冲伏安技术读取MB电信号的变化，检测待测目标物；所述PBS为缓冲液，由10mM Na2HPO4，10mM NaH2PO4,140mM NaCl,1mM KCl,1mM MgCl2,1mM CaCl2组成，最终溶液的pH值为7.4；所述的HAP1、HAP2、Primer、Aptamer、Helper、聚合酶、内切酶和dNTP的摩尔与活性的比为1摩尔：10摩尔：1摩尔：1摩尔：1摩尔：40U：40U：2摩尔；所述聚合酶为Phi29DNA聚合酶；所述内切酶为Nt.BsmAI内切酶；HAP1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；HAP2的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；Primer的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；Aptamer的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；Helper的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。