[发明专利]一种建立农杆菌介导东农冬麦1号成熟胚遗传转化的方法

摘要

本发明公开了一种建立农杆菌介导东农冬麦1号成熟胚遗传转化的方法，包括：挑选当年籽粒饱满的东农冬麦1号成熟种子，消毒，灭菌，清洗，无菌干燥后取胚，接种在诱导培养基中培养，再置于预培养培养基中进行预培养得到预培养愈伤组织；取农杆菌在YEP培养基划线培养；接着挑取培养得到的农杆菌单菌落接种在液体YEB培养基中培养至对数期，离心得到菌液；将菌液加入侵染培养基中重悬得到混合物料；将预培养愈伤组织浸入混合物料中侵染，无菌干燥，置于含有两层无菌滤纸的培养皿中进行共培养；再置于恢复培养基上进行恢复培养；接着置于分化筛选培养基上进行抗性筛选；再置于生根培养基中进行壮苗生根培养，炼苗，然后将植株移栽到花盆中培养。

主权项

一种建立农杆菌介导东农冬麦1号成熟胚遗传转化的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、挑选当年籽粒饱满的东农冬麦1号成熟种子，消毒，灭菌，清洗后，置于黑暗培养箱的无菌水中过夜；然后在无菌状态下，将过夜后的种子无菌干燥后，采用胚切伤略带胚乳法进行取胚，将胚的盾片朝上接种在诱导培养基中培养得到胚性愈伤组织；再将胚性愈伤组织置于预培养培养基中进行预培养得到预培养愈伤组织；S2、取农杆菌在YEP培养基划线培养；接着挑取培养得到的农杆菌单菌落接种在液体YEB培养基中培养至对数期，离心得到菌液；将菌液加入侵染培养基中重悬得到混合物料；S3、将预培养愈伤组织浸入混合物料中侵染，吸取多余菌液，无菌干燥，然后置于含有两层无菌滤纸的培养皿中进行共培养3～5d；再置于恢复培养基上进行恢复培养2周；接着置于分化筛选培养基上进行抗性筛选4周得到再生植株，其中每隔2周更换1次分化筛选培养基；S4、将再生植株置于生根培养基中进行壮苗生根培养18～22d后，打开瓶口炼苗2～4d，然后将植株移栽到花盆中培养。