[发明专利]一种高产普鲁兰酶的重组短小芽孢杆菌及其应用

摘要

本发明公开了一种高产普鲁兰酶的重组短小芽孢杆菌及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过构建重组质粒pulA/pSVEB，并转化至短小芽孢杆菌Brevibacillus brevis(CCTCC AB94025)中，得到重组菌pulA/pSVEB/Brevibacillus brevis。该菌株产普鲁兰酶的发酵培养基为：葡萄糖30g/L，牛肉浸膏30g/L，棉籽粉5g/L，MgCl₂·6H₂O 12g/L。培养条件为：发酵温度30℃，pH为7.0。本发明实现了普鲁兰酶在短小芽孢杆菌中的胞外表达，3L罐发酵72h，发酵上清液酶活可达988.5U/mL。本工艺采用工业上常用的葡萄糖、棉籽粉、牛肉浸膏、无机盐等原料进行生产，简单易行，适用于大规模生产。

主权项

1.一种高产普鲁兰酶的重组菌，其特征在于，所述重组菌以短小芽孢杆菌为宿主，通过重组质粒pulA/pSVEB表达来源于脱支芽孢杆菌的普鲁兰酶；所述重组质粒pulA/pSVEB是将缺失了启动子和信号肽的pWB980、普鲁兰酶表达元件、缺失了信号肽的pET20b(+)连接成环得到的；所述普鲁兰酶表达元件的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。