[发明专利]八角莲的快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种八角莲快速繁殖方法，包括以下步骤步骤一制作八角莲的无菌外植体；步骤二利用诱导培养基培养所述无菌外植体，得到胚性愈伤组织；步骤三利用第一增殖培养基培养所述胚性愈伤组织，继代培养2～3代，得到继代愈伤组织；步骤四利用分化培养基培养所述继代愈伤组织，得到体胚；步骤五利用第二增殖培养基培养所述体胚，得到继代体胚；步骤六利用植株再生培养基培养所述继代体胚，得到八角莲植株。在本发明中，获得的八角莲胚性细胞可以诱导八角莲植株的再生，具有生长速度快、植株再生频率高、性状稳定等优点。

主权项

一种八角莲的快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：制作八角莲的无菌外植体，获得无菌外植体的步骤为：选取八角莲的叶片或根或茎作为外植体，将所述外植体置于烧杯中，用两性表面活性剂浸泡，并置于超声波中震荡10～20min，用去离子水冲洗40～50min，在冲洗过程中用软毛刷轻轻洗刷所述外植体表面的污垢，然后用无菌滤纸吸干所述外植体外部的水分后切成5mm2的小块，得到所述无菌外植体；所述两性表面活性剂为：20～25重量份的N‑长链烷氧基羧酸型甜菜碱，15～18重量份的α‑十六烷基三甲基甜菜碱，10～13重量份的N‑烷基‑β‑亚氨基二丙酸，5～10重量份的十二烷基二甲基甜菜碱和60～70重量份的无菌水的混合溶液；步骤二：利用诱导培养基培养所述无菌外植体，得到胚性愈伤组织，所述诱导培养基由MS、0.5～2.0mg/L的2,4‑D生长素、1.0～1.5mg/L的木醋液、0.2～0.5mg/L的植物精油和6g/L的琼脂组成；步骤三：利用第一增殖培养基培养所述胚性愈伤组织，继代培养2～3代，得到继代愈伤组织，所述第一增殖培养基由MS、0.5～2.0mg/L的2,4‑D生长素、20～25mg/L的水苏糖和6g/L的琼脂组成；步骤四：利用分化培养基培养所述继代愈伤组织，得到体胚，所述分化培养基由MS，0～1.0mg/L的6‑苄氨基腺嘌呤分裂素、0.5～2.0mg/L的萘乙酸和6g/L的琼脂组成；步骤五：利用第二增殖培养基培养所述体胚，得到继代体胚，所述第二增殖培养基由MS、1.0mg/L的6‑苄氨基腺嘌呤分裂素、0.5～2.0mg/L的萘乙酸和2.0mg/L的2,4‑D生长素组成；所述第二增殖培养基位于转速为120r/min的摇床中，且所述第二增殖培养基每隔3～5天更换一次培养基；步骤六：利用植株再生培养基培养所述继代体胚，得到八角莲植株，所述植株再生培养基由MS、1.0～1.5mg/L的中药粉、1.0～1.4mg/L的赤霉素3，0.2～0.6mg/L的吲哚丁酸、0.3～0.7mg/L的海泡石粉和6g/L的琼脂组成；所述中药粉的制作方法为：将重量份数为30～40份的八角莲、18～25份的风流果、23～28份的灵香草、15～17份的融安金桔和10～15份的白僵蚕混合后煎煮30～40min，过滤得中药渣，经高压灭菌后烘干，然后粉碎过200目筛网，即得所述中药粉；其中，所述无菌外植体、所述胚性愈伤组织、所述继代愈伤组织和所述体胚在各自培养基中的培养条件均为：温度20℃～24℃，pH值5.6～6.0，暗培养15～20天，所述继代体胚在植株再生培养基中的培养条件为24～26℃，1000～2000Lux光照条件下培养至植株形成，其中光照时间为每天10h。