[发明专利]一种真核细胞III型启动子表达CRISPR sgRNA的方法及其应用在审
| 申请号： | 201510500937.X | 申请日： | 2015-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN105255937A | 公开（公告）日： | 2016-01-20 |
| 发明（设计）人： | 张智英;闫强;徐坤;邢佳妮;郭杨;任充华 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/79 | 分类号： | C12N15/79;C12N15/85;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 刘震 |
| 地址： | 712100 陕西省咸*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明是利用一个真核细胞III型启动子（U6或H1）启动由Drosha切割位点串联的多个发卡结构小RNA的表达，在真核细胞内表达后可以产生多个有生物活性的CRISPR sgRNA，以U6-sgRNA-shRNA-sgRNA的结构为例，这种U6启动表达的结构在一次转录中产生含有多个sgRNA和shRNA的初级转录本，在真核细胞中这些sgRNA经过加工后可以分别识别各自的靶位点，从而指导Cas9蛋白打靶多个位点，为多基因编辑打下基础。相比于传统的分别表达多个单一gRNA的方法和植物上新近报道的tRNA-gRNA系统，本发明的结构更简单，构建更方便。此外，本发明还可以通过Golden Gate的方法继续串联shRNA-sgRNA的序列打靶更多的位点或者表达多个shRNA干扰基因的表达。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 真核细胞 iii 启动子 表达 crispr sgrna 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
基于Drosha靶序列的特点和III型启动子实现CRISPR‑Cas9系统sgRNA (又称gRNA)和/或RNA干扰shRNA (或miRNA)等多个小RNA共表达的方法，所述的方法通过III型启动子同时启动多个串联的sgRNA和/或shRNA表达，通过Drosha靶序列和细胞中RNA剪切机制实现多个功能性sgRNA和/或shRNA的表达并各自发挥作用。
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