[发明专利]一种基于凝胶色谱柱检测多溴联苯醚羟基代谢物的方法

摘要

本发明提供了液质联用检测多溴联苯醚及其羟基代谢物的凝胶色谱柱，采用如下方法制备称取凝胶和溶剂，将凝胶混合于溶剂中，摇匀溶胀；取一支干燥洁净的色谱柱，然后向色谱柱内加入溶剂，排出玻璃砂芯滤板下方和活塞之间的气泡，使溶剂充满此部分空间；将凝胶悬浮液倒入于色谱柱中，在凝胶层之上加入海沙，即制得所述凝胶色谱柱。该凝胶色谱柱制备方法简单，能够有效克服复杂的基体效应，能对含有机污染物基体中的多种杂质进行分离，从而有效地除去多种杂质，避免了对后续有机污染物检测的干扰。本发明同时还提供了基于上述凝胶色谱柱检测多溴联苯醚及其羟基代谢物的方法，该方法有操作简单、重现性好、灵敏度高和准确度高的优点。

主权项

一种基于凝胶色谱柱检测多溴联苯醚羟基代谢物的方法，所述凝胶色谱柱为采用如下方法制备的凝胶色谱柱：(1)、称取聚苯乙烯凝胶和溶剂，其中每1克聚苯乙烯对应量取5～8毫升溶剂，所述的溶剂为环己烷和乙酸乙酯的混合溶液，将聚苯乙烯凝胶混合于溶剂中，摇匀，然后进行溶胀，溶胀时间大于24小时，溶胀平衡后，倒出上清液以及悬浮颗粒杂质，备用；(2)、取一支干燥洁净的色谱柱以及一支硅胶软管，将硅胶软管连接在色谱柱的下端出口处，然后向色谱柱内加入占柱体积20～30％的溶剂，静置，直至色谱柱内的玻璃砂芯滤板中无气泡溢出，然后打开活塞，挤压硅胶软管，排出玻璃砂芯滤板下方和活塞之间的气泡，使溶剂充满此部分空间，然后关闭活塞；(3)、将溶胀后的聚苯乙烯凝胶和溶剂倒入烧杯中，充分搅拌直至聚苯乙烯凝胶均匀的悬浮在溶剂中，制得凝胶悬浮液，然后将凝胶悬浮液由色谱柱的顶端倒入于色谱柱中，使凝胶悬浮液自然沉降，当色谱柱底部的凝胶悬浮液沉积至1/5柱体积时，打开色谱柱下端活塞，并调节流速至2～3mL/min，然后继续倒入凝胶悬浮液至柱体积5/6处，并保持凝胶始终浸泡在溶剂中，待凝胶完全沉降均匀后，在凝胶层之上加入1/12柱体积的海沙，铺平，即制得所述凝胶色谱柱；其特征在于：所述检测多溴联苯醚羟基代谢物的方法包括以下步骤：(1)、将待测样品与硅藻土按照1:8～10的体积比混合，再用环己烷和乙酸乙酯按照1:1的体积比混合后的溶液进行洗脱，收集并浓缩待测样品洗脱液，制得浓缩液A；(2)、在浓缩液A中加入内标碳13标记内标4′‑OH‑BDE‑17、3′‑OH‑BDE‑28、2′‑OH‑BDE‑28、4′‑OH‑BDE‑49、6‑OH‑BDE‑47、2′‑OH‑BDE‑68、6‑OH‑BDE‑85、5′‑OH‑BDE‑99、4′‑OH‑BDE‑101、3′‑OH‑BDE‑154和4‑OH‑BDE‑187的混合标准溶液，浓度为100ng/mL；将以上物质加入浓缩液中并混合均匀，再将浓缩液注入色谱柱内，直至浓缩液的液面与海砂面平齐；(3)、采用1.2～1.4倍柱体积的环己烷和乙酸乙酯进行洗脱，洗脱流速为1.00～1.50mL/min，弃去前50～60％柱体积的洗脱液，收集剩余部分的洗脱液于蒸发瓶中，后续经旋转蒸发与氮吹浓缩至0.9～1.1mL，制得浓缩液B，供LC‑MS检测用；(4)、将浓缩液B注入LC‑MS中，采用C18液相色谱柱，流动相采用溶剂Ⅰ乙腈和溶剂Ⅱ水组成，梯度淋洗条件为溶剂比Ⅰ:Ⅱ由50～60:40～50至70～80:20～30，在前18～22分钟，流速为0.35～0.40mL min‑1；在运行前，柱平衡4～6分钟，柱温设置为38～42℃，柱进样体积为8～12μL，质谱检测器采用负离子电喷雾离子源ESI，多反应监测模式；气帘气，雾化气、碰撞气均为氮气；流速为4～6L/min，温度为340～360℃，保护气流速为10～12L/min，温度为380～420℃；毛细管和喷嘴电压分别为3300～3600V和450～550V；喷雾器压力和电子倍增电压分别设置为45～55psi和750～850V；每个多反应监测转换的停留时间为18～22ms；(5)、采用同位素稀释内标法定量，即以待测物浓度为横坐标，待测物峰面积与相应的同位素峰面积之比为纵坐标，得到工作曲线，从而计算待测样品中4′‑OH‑BDE‑17、3′‑OH‑BDE‑28、2′‑OH‑BDE‑28、4′‑OH‑BDE‑49、6‑OH‑BDE‑47、2′‑OH‑BDE‑68、6‑OH‑BDE‑85、5′‑OH‑BDE‑99、4′‑OH‑BDE‑101、3′‑OH‑BDE‑154和4‑OH‑BDE‑187的含量。