[发明专利]一种走马胎愈伤组织诱导及组培苗快繁方法

摘要

本发明公开了一种走马胎愈伤组织诱导及组培苗快繁方法，采用走马胎种子无菌播种获得无菌植株，以无菌植株的茎段和芽进行愈伤组织诱导，通过愈伤组织分化成芽的途径可以快速获得大量芽，从而弥补一些植物组织培养阶段的丛生芽增殖系数低的缺陷。采用本发明方法可以在愈伤组织分化阶段快速增加走马胎的芽数，可在短时间内获得大量走马胎组培苗，从而降低培养成本，节约能耗。而且本方法操作简单，生产成本低，可工厂化生产走马胎的种苗，为走马胎可持续利用和保护生态环境多样性奠定基础。

主权项

一种走马胎愈伤组织诱导及组培苗快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）在超净工作台上，将走马胎种子经灭菌处理后接入MS培养基上培养30～50 d，种子萌芽，得到无菌植株；将无菌植株的茎段和芽接入愈伤组织诱导培养基上培养35～45 d；所述愈伤组织诱导培养基为：MS+2,4‑D0.5 mg/L+6‑BA0.1 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂5 g/L，pH值为5.8； (2) 在超净工作台上，将走马胎的茎段和芽诱导得到愈伤组织切分成小块，接入增殖培养基中培养30 d；所述增殖培养基为：MS+2,4‑D0.5～2.0 mg/L+6‑BA0.1～0.5 mg/L+TDZ0.5～2.0 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂5 g/L，pH值为5.8；（3）在超净工作台上，取出步骤（2）中得到的愈伤组织切分成小块，接入分化培养基中培养30 d；所述分化培养基为：MS+ZT0.5～3.0 mg/L+IBA0.1～0.5 mg/L + TDZ0.5～2.0 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂5 g/L，pH值为5.8；（4）将步骤（3）中得到的芽切分成单芽，接入壮芽培养基中培养30～40 d；所述壮芽培养基为MS+6‑BA1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂5 g/L，pH值为5.8；（5）将步骤（4）中得到的壮芽的基部切掉，接入生根培养基中培养45～55 d，得到走马胎组培苗；所述生根培养基为1/2MS+NAA2.0 mg/L+6‑BA0.5 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂5 g/L，pH值为5.8；所述愈伤组织诱导、增殖培养、分化培养、壮芽培养及生根培养阶段的培养条件是：培养温度为25±3℃, 光照时间为12 h/d，光照强度为2000 Lx。