[发明专利]一种用于检测K-ras基因突变的引物、探针及检测方法

摘要

一种用于检测K-ras基因突变的引物、探针及检测方法，采用AMRS-PCR法检测K-ras基因突变情况：利用设计的特异性引物探针配置PCR反应液，加入人血液样本中提取的DNA，通过荧光实时定量PCR仪检测K-ras基因12密码子2155位GGT碱基突变为GAT、AGT、GTT、GCT、TGT、CGT。本发明具有更高特异性和灵敏度，可检测出样品中含量低至0.1-1.0％突变基因；结合实时PCR平台实现扩增时闭管操作，操作简单，无需产物后处理，能最大程度地避免交叉污染和环境污染；具有简单、方便、快速、灵敏的优点，仅需90分钟即可得到准确结果，易于在临床开展；分2管进行PCR反应能检测6种K-Ras突变基因，操作简单、经济高效、可进行高通量样本检测；血液样本具有取材简便，减少了检测样本获取的困难度。

主权项

一种用于检测K‑ras基因突变的引物、探针，其特征在于：其引物探针序列如下：(1)12 GGT>GAT置换突变的引物探针信息：上游引物F：5’‑GGCCAGAGGCTCAGCGGCTCCCAGG‑3’下游引物R：5’‑TCCCTCATTGCACTGTACTCCTCTTG‑3’探针P1：5’‑FAM‑ACTAGTTGGAGCTGATC‑BHQ‑3’(2)12 GGT>AGT置换突变的引物探针信息：上游引物F：5’‑GGCCAGAGGCTCAGCGGCTCCCAGG‑3’下游引物R：5’‑TCCCTCATTGCACTGTACTCCTCTTG‑3’探针P2：5’‑HEX‑ACTAGTTGGAGCTGATGC‑BHQ‑3’(3)12 GGT>GTT置换突变的引物探针信息：上游引物F：5’‑GGCCAGAGGCTCAGCGGCTCCCAGG‑3’下游引物R：5’‑TCCCTCATTGCACTGTACTCCTCTTG‑3’探针P3：5’‑ROX‑ACTAGTTGGAGCTGGTTC‑BHQ‑3’(4)12 GGT>GCT置换突变的引物探针信息：上游引物F：5’‑GGCCAGAGGCTCAGCGGCTCCCAGG‑3’下游引物R：5’‑TCCCTCATTGCACTGTACTCCTCTTG‑3’探针P4：5’‑FAM‑ACTAGTTGGAGCTGGCTC‑BHQ‑3’(5)12 GGT>TGT置换突变的引物探针信息：上游引物F：5’‑GGCCAGAGGCTCAGCGGCTCCCAGG‑3’下游引物R：5’‑TCCCTCATTGCACTGTACTCCTCTTG‑3’探针P5：5’‑HEX‑ACTAGTTGGAGCTGTGTC‑BHQ‑3’(6)12 GGT>CGT置换突变的引物探针信息：上游引物F：5’‑GGCCAGAGGCTCAGCGGCTCCCAGG‑3’下游引物R：5’‑TCCCTCATTGCACTGTACTCCTCTTG‑3’探针P6：5’‑ROX‑ACTAGTTGGAGCTGCGTC‑BHQ‑3’(7)野生型的引物探针信息：上游引物F：5’‑GGCCAGAGGCTCAGCGGCTCCCAGG‑3’下游引物R：5’‑TCCCTCATTGCACTGTACTCCTCTTG‑3’探针P7：5’‑CY5‑ACTAGTTGGAGCTGGGTC‑BHQ‑3’。