[发明专利]一种甘蓝叶片小RNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种甘蓝叶片小RNA的提取方法，包括以下步骤：甘蓝叶片采集，液氮速冻，-80℃保存待用；液氮研磨甘蓝叶片至粉末状，加入裂解液进行样品预处理；离心取上清，并加入裂解液等体积小RNA提取液，震荡混匀后室温静置5min；离心取上清，并加入1/5上清体积的氯仿和异戊醇混合液抽提；离心取上清，加入与上清等体积的异丙醇沉淀，放于-20℃沉淀1h；离心弃上清，沉淀用75%乙醇清洗，干燥后，用适量RNase free ddH₂O溶解沉淀，得到甘蓝叶片小RNA。本发明先对样品进行预处理，再以RNAiso for Small RNA为提取液，对小RNA进行提取，获得了高质量的小RNA，为加速甘蓝小RNA研究奠定基础，而且本发明具有快速、稳定、操作简便等特点，具有广泛的应用前景。

主权项

一种甘蓝叶片小RNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、采集甘蓝叶片，立即于液氮中速冻，之后放于‑80℃冰箱待用；步骤二、取步骤一处理过的甘蓝叶片，置于液氮预冷的研钵中研磨成粉末，并向粉末中加入CTAB裂解液于离心管，混匀，室温放置3~5min，之后于离心机上12000rpm，4℃，离心5~10min；所述CTAB裂解液与所述甘蓝叶片的质量比为5:1；步骤三、取步骤二离心所得液体的上清液，转移至新的离心管中，并向其中加入小RNA提取液，混匀，室温放置3~5min，之后于离心机上12000rpm，4℃，离心5~10min；所述小RNA提取液与步骤二所述CTAB裂解液的质量比为1:1；步骤四、取步骤三离心所得液体的上清液，转移至新的离心管中，并向其中加入上清液体积1/5的氯仿和异戊醇混合液，混匀，室温放置3~5min，之后于离心机上12000rpm，4℃，离心15~20min；步骤五、取步骤四离心所得液体的上清液放于新的离心管中，并加入与上清液等体积的异丙醇，混匀，放于‑20℃冰箱中静置1~2h，之后于离心机上12000rpm，4℃，离心10~15min；步骤六、弃步骤五离心所得上清液，留沉淀，并用75%乙醇溶液清洗沉淀；室温晾干，再用RNase free ddH₂O溶解沉淀，即得到甘蓝叶片小RNA。