[发明专利]3T3-L1前脂肪细胞系的诱导分化方法

摘要

本发明涉及脂肪细胞诱导领域，特别涉及3T3‑L1前脂肪细胞系的诱导分化方法：3T3‑L1前脂肪细胞系经复苏，培养，传代后，至长满培养基，继续培养36‑48小时后加入含有诱导剂的含10％胎牛血清的高糖DMEM培养液进行诱导分化72‑96小时；诱导剂中地塞米松0.9‑1.1μM，IBMX 1.0mM，胰岛素1.8‑2.0μM；加入含有胰岛素和胎牛血清的高糖DMEM培养液继续诱导48‑96小时；之后每48小时换液一次，自加入诱导剂起第8‑10天成熟脂肪细胞可用。该诱导分化方法缩短整个3T3‑L1前脂肪细胞系的诱导过程，且脂肪细胞转化率稳定，不受细胞代数及细胞培养皿类型的影响，转化率误差在5％以内。

主权项

1.3T3‑L1前脂肪细胞系的诱导分化方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)、3T3‑L1前脂肪细胞系经复苏，培养，传代后，至长满培养基，继续培养36‑48小时后进行诱导分化；(b)、所述诱导分化为：加入含有诱导剂的含10％胎牛血清的高糖DMEM培养液，培养72‑96小时；其中，所述诱导剂各成分在所述高糖DMEM培养液中的终浓度为：地塞米松0.9‑1.1μM，IBMX1.0mM，胰岛素1.8‑2.0μM；(c)、加入含有1.8‑2.0μM胰岛素和10％胎牛血清的高糖DMEM培养液继续诱导48‑96小时；之后每48小时换液一次，换液为含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基，自加入诱导剂起第8‑10天成熟脂肪细胞可用；所述复苏为：从液氮中取出细胞株，立即置于37±2℃水浴中，至细胞液完全溶解时取出，于室温1000‑1200rpm离心3‑5min，弃去上清，加入培养液，吹打重悬，将细胞悬液加入培养器皿中，然后将所述培养器皿置于5％±1％CO2的37±2℃恒温培养箱中培养；所述复苏中的培养液为含10％±2％小牛血清和1％±0.1％青链霉素的高糖DMEM培养液。