[发明专利]一种用于赭曲霉毒素A富集净化的免疫磁珠及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种用于赭曲霉毒素A富集净化的免疫磁珠及其制备方法和应用，它是以羧基磁珠为载体，赭曲霉毒素A单克隆抗体为识别中间体，经过活化‑偶联‑洗涤‑封闭的过程制备出偶联有赭曲霉毒素A单克隆抗体的免疫磁珠，在合适的缓冲液中于一定条件下孵育可以高效捕捉、富集检测样本中的赭曲霉毒素A。本发明用于赭曲霉毒素A富集净化的免疫磁珠具有浓缩待测样品中赭曲霉毒素A浓度、提高检测下限、排除杂质干扰、提高检测准确性和可靠性、减少样品处理时间达到快速检测的优点。

主权项

一种用于赭曲霉毒素A富集净化的免疫磁珠的制备方法，其是以粒径2.8μm的羧基磁珠为载体，羧基磁珠末端具有反应活性的羧基基团，在经活化剂EDC‑NHS组合处理后，活化磁珠与赭曲霉毒素A单克隆抗体进行偶联，制备成能够富集净化赭曲霉毒素A的免疫磁珠，其特征在于：所述赭曲霉毒素A单克隆抗体是用赭曲霉毒素A人工抗原免疫白鼠所得到的，所述赭曲霉毒素A人工抗原是赭曲霉毒素A半抗原与载体蛋白的偶联物，所述赭曲霉毒素A半抗原是按照如下方法制备得到的：Ⅰ、将100mg赭曲霉毒素A溶于5mL丙酮中，再加入50μL 3‑溴丙缩醛和40mg碳酸钾，回流反应5h，停止反应，加水‑乙酸乙酯萃取，分去水相，加无水硫酸钠干燥蒸干，得到粗产物，加石油醚洗涤结晶，得到中间产物；Ⅱ、将中间产物加乙醇溶解后，再加入2mL稀盐酸和5mL蒸馏水，60℃反应4h，停止反应，加氢氧化钠水溶液调节pH到6，加二氯甲烷萃取，蒸干，加乙醚重结晶，得到赭曲霉毒素A半抗原，其分子结构式为：