[发明专利]一种黑色素细胞的培养方法

摘要

本发明公开了一种黑色素细胞的培养方法。该方法包括在黑色素细胞增殖培养之前先进行预培养2‑4h，所述预培养基为：DMEM培养基与Ham's F‑12培养基按体积比2‑4:1混合；腺嘌呤1.6‑2.0×10^‑4M；青霉素80‑100单位/mL；链霉素80‑100μg/mL；氢化可的松0.1‑0.5μg/mL；胰岛素2‑6μg/mL；表皮生长因子5‑12ng/mL；霍乱毒素0.8‑1.5×10^‑10M；胎牛血清4‑7％。上述方法中的预培养，促进了黑色素细胞贴壁，提高了黑色素细胞所占比例和细胞活性。传代后从最初的黑色素细胞占1％，最高提高到了90％，并且黑色素细胞形态和功能及遗传性状稳定。

主权项

1.一种黑色素细胞的培养方法，其特征在于，包括在黑色素细胞增殖培养之前先进行预培养2‑4h，预培养的接种密度为2‑10×104个细胞/cm2；所述预培养基为：DMEM培养基与Ham's F‑12培养基按体积比2‑4:1混合；腺嘌呤1.6‑2.0×10‑4M；青霉素80‑100单位/mL；链霉素80‑120μg/mL；氢化可的松0.1‑0.5μg/mL；胰岛素2‑6μg/mL；表皮生长因子5‑12ng/mL；霍乱毒素0.8‑1.5×10‑10M；胎牛血清4‑7％；在预培养之前还包括：将离体的表皮用分解混合酶进行消化培养0.5‑2小时，终止消化后，过滤、离心，然后接种预培养基进行预培养；所述分解混合酶为胰蛋白酶和I型胶原酶；预培养后，去掉预培养基，然后将贴壁后的细胞转移到增殖培养基，所述增殖培养基为M2培养基；所述增殖培养的方法为：每周换液3次，当细胞达到70‑80％饱和后，对黑色素细胞进行消化，回收，重悬，播种进行扩增传代；对黑色素细胞进行消化的方法为：将1g/L胰蛋白酶·0.152g/L EDTA溶液加入到培养基中，孵育3‑5min，终止消化；所述播种的密度为5‑10×103个细胞/cm2。