[发明专利]一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种微生物复合菌剂，其包括菌数比为（1‑10）：1的丁酸梭菌和蛭弧菌，该微生物复合菌剂对家禽腹泻具有优异的防治效果。其制备方法采用双层包埋法，先用壳聚糖对蛭弧菌进行包埋后，再用含丁酸梭菌的包埋液进行二次包埋，该方法能很好地对两种菌进行固定化，且消除了存放过程中两种菌之间的相互影响，最大程度地降低了菌活损失。

主权项

1.一种微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于其步骤如下：（1）在LB液体培养基中接种大肠杆菌，培养，离心，收集菌体，100ml大肠杆菌培养液中的菌体重新混悬在5‑10ml的LB液体培养基中，接入蛭弧菌，于25‑37℃、pH6.0‑8.5下培养36‑48h，蛭弧菌培养液于4℃、6000rpm下离心20min，弃沉淀，取上清液于4℃、16000rpm离心20min，取沉淀，混悬于LB液体培养基中，制成浓度≥10¹¹cfu/ml的蛭弧菌浓缩液；（2）将壳聚糖溶解于稀醋酸中，配制成壳聚糖溶液，取等体积的蛭弧菌浓缩液，与壳聚糖溶液混合均匀，得蛭弧菌混合液；（3）在所述蛭弧菌混合液中逐滴加入三聚磷酸钠水溶液，充分搅拌，制成蛭弧菌包埋液，将该包埋液离心，取沉淀备用；（4）将斜面培养的丁酸梭菌在RCM液体培养基中，于30‑38℃、pH6.5‑7.5下厌氧培养24‑48h，再接种于RCM液体培养基中，于30‑38℃、pH6.5‑7.5的环境下厌氧培养24‑48h，得丁酸梭菌培养液；（5）将壳聚糖溶解于稀醋酸中，配制成壳聚糖溶液，按所述菌数比取丁酸梭菌培养液，与等体积的壳聚糖溶液混合均匀，得丁酸梭菌混合液；（6）将步骤（3）所得的沉淀加入所述丁酸梭菌混合液中，然后逐滴加入三聚磷酸钠水溶液，充分搅拌，制成复合菌液。