[发明专利]一种β-半乳糖苷酶的固定化方法

摘要

本发明提供一种β‑半乳糖苷酶的固定化方法，以细菌纤维素/海藻酸钠复合凝胶为固定化载体固定β‑半乳糖苷酶，包括固定化载体的制备和固定化β‑半乳糖苷酶的制备，其中固定化载体的制备包括种子培养，细菌纤维素凝胶的制备，细菌纤维素凝胶的处理、打浆和细菌纤维素/海藻酸钠混合液的制备。本发明制备得到的细菌纤维素/海藻酸钙复合凝胶固定化β‑半乳糖苷酶的酶活力回收率达到70～78％，最适pH偏碱性、增加至pH7.0～7.5，热稳定性提高、最适温度升高为40～45℃，米氏常数为9.5～10.5mmol/L，具有较好的稳定性和较高的应用价值。

主权项

1.一种β‑半乳糖苷酶的固定化方法，其特征在于以细菌纤维素/海藻酸钠复合凝胶为固定化载体，包括固定化载体的制备和固定化β‑半乳糖苷酶的制备，其中固定化载体的制备包括种子培养，细菌纤维素凝胶的制备，细菌纤维素凝胶的处理、打浆和细菌纤维素/海藻酸钠混合液的制备；固定化载体的制备通过以下步骤实现：（1）种子培养：取活化的木醋杆菌CGMCC No.1.1812斜面种子，接入在HS培养基中，在30℃下，160r/min，培养24h；（2）细菌纤维素凝胶的制备：以2‑10%的接种量接入装有HS培养基的发酵容器中， 30℃下培养2‑6d，形成细菌纤维素凝胶；（3）细菌纤维素凝胶的处理、打浆：细菌纤维素凝胶用水冲洗，再将其浸泡于0.1mol/l的碱液中，100℃煮沸6h，再用蒸馏水或0.1mol/l的醋酸溶液冲洗，直至pH值为7.0，然后细菌纤维素凝胶湿重与磷酸盐缓冲液以质量/体积之比为1:1的比例置于打浆机中，转速为300‑1000r/min，时间为5‑15min，形成细菌纤维素乳浊液；（4）细菌纤维素/海藻酸钠混合液的制备：将海藻酸钠和细菌纤维素乳浊液以质量/体积之比为1:14的比例进行混合，水浴加热，边加热边搅拌，至海藻酸钠完全溶解，室温至冷却；固定化β‑半乳糖苷酶的制备方法为：量取细菌纤维素/海藻酸钠混合液20‑30ml，与20‑30ml的β‑半乳糖苷酶均匀混合，然后用注射器吸取混合液滴入氯化钙溶液中，充分反应2‑6h，洗涤、离心、真空干燥得固定化β‑半乳糖苷酶。