[发明专利]一种耐酸性苏氨酸生产菌及其构建方法与应用

摘要

本发明提供了一种耐酸性苏氨酸生产菌的构建方法，并通过该方法获得的耐酸性苏氨酸生产菌可用于制备苏氨酸，利用谷氨酸氧化酶基因对谷氨酸进行脱氨反应，将其转化为α‑酮戊二酸，生成的游离NH₃和H₂O₂则可以中和胞内多余的质子从而提高菌体的耐酸能力，所述耐酸系统能够有效应用到生物产品的发酵生产中，该系统不会产生对菌体具有抑制作用的γ‑氨基丁酸或胍丁胺，不需要表达γ‑氨基丁酸或胍丁胺转运蛋白的基因，减少了重组菌株的负担；反应中生成的α‑酮戊二酸可以直接进入TCA循环，为菌体生长提供能量，有效减少液氨的用量，并且有效避免了pH波动对发酵造成的影响。

主权项

1.一种耐酸性苏氨酸生产菌的构建方法，其特征在于：以苏氨酸生产菌E.coli THRD保藏号CGMCC No.11074为研究对象，通过分子改造，在pTrc99A质粒上过表达谷氨酸氧化酶基因，或者整合谷氨酸氧化酶基因到E.coli THRD基因组，得到耐酸性苏氨酸生产菌株，具体步骤如下：(1)合成谷氨酸氧化酶基因片段；(2)将谷氨酸氧化酶基因及其表达载体pTrc99A用HindⅢ和BamHⅠ进行双酶切后连接，连接产物转化至E.coli THRD中；或者利用Red同源重组基因敲除方法，整合谷氨酸氧化酶基因到E.coli THRD的阿拉伯糖基因araABD位点上；其中，所述谷氨酸氧化酶的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示序列，所述阿拉伯糖基因araABD的核苷酸序列为SEQ ID No.2所示序列，所得表达谷氨酸氧化酶的基因工程菌即为耐酸性苏氨酸生产菌。