[发明专利]一种南极磷虾油中虾青素含量的测定方法

摘要

本发明公开了一种南极磷虾油中虾青素含量的测定方法，其工艺路线如下南极磷虾油在以乙醇为溶剂的NaOH‑乙醇溶液中低温皂化，使虾青素酯完全转化为游离虾青素，并测定南极磷虾油中虾青素在皂化过程中的加标回收率；采用Hypersil C18色谱柱，以二氯甲烷、甲醇、乙腈、水为流动相进行梯度洗脱，流速1.0mL/min，检测器为紫外检测器，检测波长为478nm；确定游离虾青素的三种同分异构体，并采用三峰面积的加和定量。本发明只对南极磷虾油进行一步皂化处理，然后直接测定，并考察虾青素在皂化过程中的加标回收率，采用C18反相高效液相色谱法，测定的可靠性和准确性高，客观真实地测定南极磷虾油中虾青素的含量。

主权项

一种南极磷虾油中虾青素含量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、称取两份重量相同的南极磷虾油，每份0.2～0.5g，其中一份添加1ml虾青素标准品；所述虾青素标准品的浓度为1.0、2.0或4.0μg/mL；S2、向上述南极磷虾油中分别加入4～6ml无水乙醇溶解，加入0.105mol/L NaOH‑乙醇溶液2ml，定容到10～25ml，充氮后在5℃层析柜中进行皂化反应3.5h；皂化完成后，加入0.100～0.105mol/L磷酸‑乙醇溶液2～5ml终止反应；两份步骤S1所述南极磷虾油中各试剂的加入量均相同；S3、混合、离心取上清液，过0.22μm微孔滤膜，分别进行HPLC检测分析；S4、采用250mm×4.6mm×10μm规格的Hypersil C18色谱柱对虾青素进行分离检测；流动相的流速为0.5～1.0mL/min，检测器为紫外检测器，检测波长为478nm，进样量为5～50μL，柱温为20～30℃；按比例二氯甲烷:甲醇:乙腈:水＝5.0:85.0:5.5:4.5，配制溶液A；按比例二氯甲烷:甲醇:乙腈:水＝22.0:28.0:45.5:4.5配制溶液B；以A、B为流动相进行梯度洗脱；洗脱条件:0min～8min，A流动相为100％，B流动相为0％；8min～56min：A流动相从100％降到0％，B流动相从0％升到100％；S5、得出进样中游离虾青素的含量，得到加标回收率，进而获得南极磷虾油中虾青素含量，具体步骤为：S51、利用液相色谱检分别测得步骤S2得到的两种样品游离虾青素的面积，并利用面积归一化法分别得到总面积，总面积A＝A全反式+1.1×A9‑顺+1.3×A13‑顺其中，A13‑顺、A全反式、A9‑顺分别为试样溶液中13‑顺虾青素、全反式虾青素、9‑顺虾青素的峰面积；1.1、1.3分别为9‑顺虾青素和13‑顺虾青素对全反式虾青素的校正因子；S52、结合步骤S4所述检测条件下得到的虾青素标准曲线，得到步骤S2得到的两种样品游离虾青素的含量；所述虾青素标准曲线为Y＝99.6569x‑5.1469其中，Y为步骤T1得到的总面积，x为游离虾青素含量；S53、加标回收率：P＝(C2‑C1)/C0×100％，其中C2为步骤S2得到的添加有标准品的磷虾油样品中游离虾青素量；C1为步骤S2得到的磷虾油样品中游离虾青素量；C0为虾青素标准品添加量；S54、利用加标回收率得到南极磷虾油中虾青素含量：南极磷虾油中虾青素含量：C＝C1/P。