[发明专利]一种用于富集与分离糖蛋白的分子印迹复合材料的制备方法

摘要

本发明公开了一种用于富集与分离糖蛋白的分子印迹复合材料的制备方法，属于材料科学与工程和生物分离工程领域。该方法先将氧化石墨烯表面硼酸官能化，通过硼亲和作用将模板糖蛋白固定在氧化石墨烯表面，采用表面印迹技术在氧化石墨烯的表面形成蛋白质印迹层，洗脱掉模板得到分子印迹复合材料。该方法制备的分子印迹复合材料对模板糖蛋白具有非常好的专一性识别能力，另外还具有结合容量高、抗干扰能力强、结合和洗脱速度快的优点，可以用于对复杂的实际样品中低浓度的糖蛋白进行富集、分离与检测。

主权项

1.一种用于富集与分离糖蛋白的分子印迹复合材料的制备方法，其特征在于步骤如下：(1)硼酸基功能化石墨烯的合成将氧化石墨烯溶于去离子水中，超声分散，得到氧化石墨水溶液，加入1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)和N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)，搅拌20‑40min后，加入3‑氨基苯硼酸单水合物(APBA)，室温搅拌18‑36h后，抽滤，分别用乙醇和水洗涤，抽滤、真空干燥得到硼酸基功能化的氧化石墨烯；氧化石墨烯水溶液的浓度为0.1～5mg/mL，超声时间为30～120min，氧化石墨烯、3‑氨基苯硼酸单水合物、1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺的质量比为1∶10∶6∶6～1∶3∶2∶2；(2)分子印迹复合材料的制备将上一步中所得到的硼酸基功能化石墨烯分散在含有模板糖蛋白的PBS缓冲溶液中，室温下反应6～12h，使糖蛋白充分组装到硼酸基功能化氧化石墨烯表面，然后加入丙烯酰胺和N，N‑亚甲基双丙烯酰胺，通氮气除氧，再加入过硫酸铵和N，N，N’，N’‑四甲基乙二胺，18～25℃交联反应20～30h，离心分离洗涤，最后用醋酸和醋酸钠的混合液洗脱模板分子，得到蛋白质印迹复合材料；硼酸基功能化氧化石墨烯与模板糖蛋白的质量比为1∶5～2∶1，丙烯酰胺和N，N‑亚甲基双丙烯酰胺的质量比为12∶1～6∶1，过硫酸铵和N，N，N’，N’‑四甲基乙二胺的质量比为25∶1～10∶1，硼酸基功能化氧化石墨烯、丙烯酰胺和过硫酸铵的质量比为5∶3∶1～1∶3∶1；其中PBS缓冲溶液的pH值为6.5～8.5，醋酸和醋酸钠的混合洗脱液的pH值为2.5～4.5。