[发明专利]一种羊齿天冬组织培养快速繁殖方法

摘要

一种羊齿天冬组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤(1)取羊齿天冬健壮植株新萌发的嫩芽作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS培养基中诱导得到无菌试管苗；(3)将所述无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽；(4)将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗获得健壮植株；(5)将所述健壮植株置于MS生根培养基中进行生根培养获得完整带根苗。(6)将所述完整带根苗在室温下炼苗，待表面角质形成后将苗取出，移栽到基质中，生长一个月后移栽到大田。采用本发明能够得到生根率达80～95％的羊齿天冬优质种苗，有效解决羊齿天冬的规模化育苗问题。

主权项

一种羊齿天冬组织培养快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒：取羊齿天冬健壮植株新萌发的嫩芽作为外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15‑30min、添加了2‑3滴吐温‑20的100毫升0.1％升汞消毒8‑10min、无菌水冲洗3‑5次，然后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于超净工作台内，切成长0.5‑1.0cm的茎段，接种到MS培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10h/d的条件下培养30天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加0.5‑1.5mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.1‑0.5mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10h/d的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5‑1.5mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.1‑0.5mg/L的吲哚丁酸IBA、0.1‑0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10h/d的条件下培养30d得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中添加0.1‑1.0mg/L2，4二氯苯氧乙酸2,4‑D 0.5‑0.1.5mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA0.1‑1.0mg/L的赤霉素GA3、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(5)生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温度为23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8‑10h/d的条件下培养30天得到完整带根苗，其中MS生根培养基中添加0.5‑4.0mg/L的萘乙酸NAA、的0.5‑3.0mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(6)炼苗移栽：将步骤(5)得到的完整带根苗在室温下炼苗4‑7天，待表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，移栽到按质量比为蛭石：泥炭土＝1：1的基质中，生长一个月后移栽到大田。