[发明专利]一种热启动Taq酶的热启动效率表征方法

摘要

本发明涉及一种热启动Taq酶的热启动效率表征方法，所述表征方法为手工热启动法、热变性时间法、最低循环数法、多重PCR法以及热变性时间与多重PCR法结合。本发明的热启动Taq酶，解决了使PCR反应发生引物二聚体以及非特异性的扩增，影响产物的特异性的问题。本发明的热启动Taq酶热启动效率表征方法从多个角度进行验证，及对热启动效率进行半定量的评估，可以保证结果的可靠性。

主权项

一种热启动Taq酶的热启动效率表征方法，包括：(1)在配制完成的PCR体系中，不加入dNTP，将该反应体系在PCR仪上完成热变性以后，加入dNTP作为对照；在另一加入修饰后热启动Taq酶的扩增体系中直接加入dNTP，进行同时扩增，反应结束后，用琼脂糖电泳检测PCR产物，比较两种操作中引物二聚体和非特异性扩增产物产生的情况，对热启动效率进行评估；(2)通过不同的热变性时间对活性的影响，对修饰得到的热启动Taq酶的效果进行半定量的评估；(3)经修饰得到的热启动Taq酶，在热变性的过程中释放活性，通过设定相同的热变性时间，检测不同的PCR体系中，累积相同的可被检测到的产物量所需要的循环数，对修饰的效果进行半定量的评估；(4)通过比较普通Taq酶和热启动Taq酶在多重扩增中产物的差异，对修饰效果进行定量评估；(5)通过设置不同的热变性时间的关系，比较普通Taq酶与热启动Taq酶的扩增能力恢复情况与热启动时间，对修饰效果进行评估。