[发明专利]一种锥栗优势共生菌根菌的人工培养方法

摘要

本发明涉及一种锥栗优势共生菌根菌的人工培养方法，所述方法包括以下步骤：(1)取锥栗菌根菌子实体，采集菌盖与菌柄交汇处的菌肉组织块；(2)将菌肉组织块置于平板培养基中，在25～28℃下培养至菌肉组织萌发出菌丝后，将菌丝转接，在25～28℃下培养至菌丝长满培养基，获得纯菌丝；(3)挑取所述纯化菌丝，接种到改良MMN液体培养基中发酵培养，获得菌液；(4)将菌液接种到扩大培养料中，在25～28℃下培养至菌丝长满培养容器，获得锥栗菌根菌剂。本发明锥栗菌根菌的人工培养方法，操作简单，利用发明培养得到的锥栗菌根菌回接锥栗幼苗时侵染率高。

主权项

1.一种锥栗优势共生菌根菌的人工培养方法，其特征在于，所述锥栗优势共生菌根菌为与锥栗根系共生的橙黄硬皮马勃；所述方法包括以下步骤：(1)组织分离：采集野生的锥栗优势共生菌根菌的子实体；从所述子实体的菌盖与菌柄交汇处，取菌肉组织块；(2)菌丝培养与提纯：将所述菌肉组织块接种在改良MMN平板培养基上，置于25～28℃下培养至菌肉组织块萌发出菌丝，将所述菌丝转接至新的改良MMN平板培养基上，在25～28℃下培养至菌丝长满平板，获得纯化菌丝；本步骤所述改良MMN平板培养基的pH值为5～6，包括以下成分：CaCl2 0.04～0.06g，MgSO4 0.12～0.16g，NaCl 0.02～0.03g，浓度为1％的FeCl3 1.0～1.5ml，KH2PO4 0.4～0.6g，Vitamib B1 80～120μg，KNO3 0.20～0.30g，12Be′的麦芽汁80～120ml，甘露醇15～20g，柠檬酸0.15～0.25g，琼脂15～20g，蒸馏水900ml；(3)液体发酵培养：挑取所述纯化菌丝，接种到改良MMN液体培养基中，在25～28℃下振荡培养10～15天，获得菌液；本步骤所述改良MMN液体培养基的pH值为5～6，包括以下成分：CaCl2 0.04～0.06g，MgSO4 0.12～0.16g，NaCl 0.02～0.03g，浓度为1％的FeCl3 1.0～1.5ml，KH2PO4 0.4～0.6g，Vitamib B1 80～120μg，KNO3 0.20～0.30g，12Be′的麦芽汁80～120ml，甘露醇15～20g，柠檬酸0.15～0.25g，蒸馏水900ml；(4)菌种扩大培养：将所述菌液接种到扩大培养料中，在25～28℃下培养至菌丝长满培养容器，收集所述菌丝，即得；本步骤所述扩大培养料中包含草炭土、玉米粉和珍珠岩；三者的质量比为草炭土：玉米粉：珍珠岩＝6～8：1～2：1～2。