[发明专利]一种弧菌通用的基因敲除自杀载体及其应用在审
申请号: | 201510593592.7 | 申请日: | 2015-09-16 |
公开(公告)号: | CN105063073A | 公开(公告)日: | 2015-11-18 |
发明(设计)人: | 罗鹏;何香燕;刘秋婷;胡超群 | 申请(专利权)人: | 中国科学院南海海洋研究所 |
主分类号: | C12N15/63 | 分类号: | C12N15/63;C12N15/03;C12N1/20 |
代理公司: | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人: | 刘明星 |
地址: | 510301 *** | 国省代码: | 广东;44 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | 本发明公开了一种弧菌通用的基因敲除自杀载体及其构建方法,并提供了其在弧菌基因敲除中的应用方法。基因敲除自杀载体pLP12,为环状载体,包括PBAD启动子、阻遏蛋白基因araC、RP4转移起始位点、氯霉素抗性基因、R6K复制起始位点、多克隆位点区和致死基因vmi480,所述的多克隆位点区至少包含两个AhdI酶切位点,自杀载体pLP12经AhdI酶切后形成线性化自杀载体pLP12T。本发明的基因敲除自杀载体中采用了全新的反向选择基因vmi480,用于替代常用的sacB基因。pLP12T携带外源片段通过接合方式转移到待突变弧菌细胞,在抗生素以及反向选择致死基因vmi480产物压力下,弧菌先后发生第一次同源重组和第二次同源重组,最终产生目的基因缺失突变株。 | ||
搜索关键词: | 一种 弧菌 通用 基因 自杀 载体 及其 应用 | ||
【主权项】:
一种基因敲除自杀载体pLP12,为环状载体,其特征在于,包括PBAD启动子、阻遏蛋白基因araC、RP4转移起始位点、氯霉素抗性基因、R6K复制起始位点、多克隆位点区和致死基因vmi480,所述的多克隆位点区至少包含两个AhdI酶切位点,所述的致死基因vmi480的核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第21‑617位碱基序列所示,所述的致死基因vmi480位于PBAD启动子下游并处于PBAD启动子控制之下。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国科学院南海海洋研究所,未经中国科学院南海海洋研究所许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201510593592.7/,转载请声明来源钻瓜专利网。