[发明专利]一种弧菌通用的基因敲除自杀载体及其应用在审

专利信息
申请号: 201510593592.7 申请日: 2015-09-16
公开(公告)号: CN105063073A 公开(公告)日: 2015-11-18
发明(设计)人: 罗鹏;何香燕;刘秋婷;胡超群 申请(专利权)人: 中国科学院南海海洋研究所
主分类号: C12N15/63 分类号: C12N15/63;C12N15/03;C12N1/20
代理公司: 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 代理人: 刘明星
地址: 510301 *** 国省代码: 广东;44
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摘要: 发明公开了一种弧菌通用的基因敲除自杀载体及其构建方法,并提供了其在弧菌基因敲除中的应用方法。基因敲除自杀载体pLP12,为环状载体,包括PBAD启动子、阻遏蛋白基因araC、RP4转移起始位点、氯霉素抗性基因、R6K复制起始位点、多克隆位点区和致死基因vmi480,所述的多克隆位点区至少包含两个AhdI酶切位点,自杀载体pLP12经AhdI酶切后形成线性化自杀载体pLP12T。本发明的基因敲除自杀载体中采用了全新的反向选择基因vmi480,用于替代常用的sacB基因。pLP12T携带外源片段通过接合方式转移到待突变弧菌细胞,在抗生素以及反向选择致死基因vmi480产物压力下,弧菌先后发生第一次同源重组和第二次同源重组,最终产生目的基因缺失突变株。
搜索关键词: 一种 弧菌 通用 基因 自杀 载体 及其 应用
【主权项】:
一种基因敲除自杀载体pLP12,为环状载体,其特征在于,包括PBAD启动子、阻遏蛋白基因araC、RP4转移起始位点、氯霉素抗性基因、R6K复制起始位点、多克隆位点区和致死基因vmi480,所述的多克隆位点区至少包含两个AhdI酶切位点,所述的致死基因vmi480的核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第21‑617位碱基序列所示,所述的致死基因vmi480位于PBAD启动子下游并处于PBAD启动子控制之下。
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