[发明专利]一种用于细胞内糖链抗原活检的双光子荧光探针、荧标试剂盒以及检测方法

摘要

本发明涉及细胞内糖链抗原活检技术领域，尤其是一种用于细胞内糖链抗原活检的双光子荧光探针、荧标试剂盒以及检测方法，通过双光子荧光标记抗体LP‑IgG和硝酸纤维素膜包被的固相抗体Ab，使得在检测时，固相抗体通过抗原反应特异性捕获待测抗原，形成免疫复合物Ab·Ag，加入双光子荧光标记抗体LP‑IgG，与免疫复合物充分反应后(LP‑IgG·Ab·Ag)，经洗涤去除非特异性物质，即可检测判定结果；克服了传统糖链抗原的检测方法中的灵敏度和稳定性较差，操作步骤繁琐的缺陷，并且也使得检测试样不再局限于血液和外周血，只要带有糖链抗原的试样即可用该双分子荧光标记探针LP制备成的试剂盒来进行检测。

主权项

一种用于细胞内糖链抗原活检的双光子荧光探针制备成的荧标试剂盒，其特征在于，其由双光子荧光标记探针LP、抗糖链抗原单克隆抗体‑Ab、硝酸纤维素膜、抗糖链抗原单克隆抗体‑IgG、阳性对照品、阴性对照品、封闭缓冲液和洗涤缓冲液组成；其中，所述的封闭缓冲液是pH为7.4，摩尔浓度为20mmol/L的PBS，并且，其中含有质量百分比为0.5％的BSA；所述的洗涤缓冲液是pH为7.4，摩尔浓度为50mmol/L的PBS，并且，其中含有质量百分比为0.05％的吐温20；双光子荧光标记探针LP，结构式为：该荧标试剂盒用于细胞内糖链抗原活检的方法，包括以下步骤：(1)包被：在硝酸纤维素膜上滴加2～6μL抗糖链抗原单克隆抗体‑Ab，一滴一点，各点间相隔1‑2cm，并滴加完成后，置于温度为4℃环境中，吸附0.5‑1h；(2)封闭：将步骤(1)包被完成的硝酸纤维素膜浸入封闭缓冲液中，在37℃下温育0.5‑2h；(3)一次洗涤：将步骤(2)封闭完成的硝酸纤维素膜采用洗涤缓冲液清洗至少三次，静置干燥；(4)点样：向步骤(3)一次洗涤完成的硝酸纤维素膜按照步骤(1)滴加2～6μL抗糖链抗原单克隆抗体‑Ab形成的点滴加阳性样品、阴性样品和待测样品，其中阳性样品、阴性样品和待测样品滴加的点的个数相等，每点滴加2‑6uL；(5)二次洗涤：待步骤(4)滴加的样品液完全渗入硝酸纤维素膜后，室温静置10‑30min，采用洗涤缓冲液清洗膜片至少三次，静置干燥；(6)荧光标记示踪：向步骤(5)处理完成的膜片上加入双光子荧光标记抗体LP‑IgG，加入量为每点滴加2‑6uL，在37℃下温育处理0.5‑2h；(7)三次洗涤：将步骤(6)处理好的膜片采用洗涤缓冲液清洗至少三次，取出膜片，去除表面残余液体；(8)检测：将硝酸纤维素膜平铺在玻璃片上，在双光子荧光显微镜下检测。