[发明专利]虾夷扇贝毒素YTX纯品的提取、制备方法

摘要

本发明公开了一种虾夷扇贝毒素YTX纯品的提取、制备方法，讲过甲醇粗提、两次YTX分离提取、YTX纯品的制备等步骤制备得到YTX样品，可用于制作YTX毒素标准品，测定海洋食品（鱼、虾、贝等）中虾夷扇贝毒素YTX的含量，属于海洋食品安全领域必须要检测的指标之一。该方法填补了国内对于贝类毒素标准品缺乏的空白，极大的促进了国内贝类毒素检测技术的发展和海洋食品安全的工作，对于国内海产品顺利出口到欧盟等发达国家，有着很大的促进作用。

主权项

 虾夷扇贝毒素YTX纯品的提取、制备方法，其特征在于，步骤如下：1）甲醇粗提向装有藻糕的离心管中加入甲醇，超声萃取，离心，收集上清液并过滤；将滤液旋转蒸干后加入甲醇淋洗，然后超声，直至溶质溶解干净，量体积并放置于‑80℃冰箱保存，备用；2）经过两次分离提取YTX粗分离：使用2.4×32cm层析柱，以70g碱性氧化铝作为填料， CHCl₃–MeOH作为初始洗脱剂洗脱，然后进行梯度洗脱，依次加入150ml的 CHCl₃–MeOH, 150ml 的MeOH，MeOH–1%氨水洗脱，收集MeOH–1%氨水部分，使用液相色谱串联质谱测其YTX浓度，合并含有YTX的洗脱液；将上述洗脱液旋转蒸干后加入甲醇淋洗，然后超声，直至溶质溶解干净为止，然后将溶解液过滤，置于玻璃瓶中，于‑80℃冰箱保存，备用；YTX纯化：使用2.4×32cm层析柱，以60g C18作为填料， 30%MeOH水溶液作为初始洗脱剂洗脱，然后进行梯度洗脱，依次用250ml 的30%MeOH水溶液，140ml的 40%MeOH水溶液，140ml的50%MeOH水溶液，140ml的60%MeOH水溶液，250ml的MeOH，梯度冲洗柱子，收集MeOH部分，使用液相色谱串联质谱测其YTX浓度，合并含有YTX的洗脱液，将上述收集液旋转蒸干后加入12ml甲醇淋洗，然后超声，直至溶质溶解干净为止，将溶解液过滤，置于玻璃瓶中，于‑80℃冰箱保存，备用；3）YTX纯品制备使用半制备液相色谱‑紫外光谱联用，以甲醇作为洗脱剂，用250mm×10mm的半制备柱，5μm C18作为填料，在273nm处检测洗脱液的紫外吸收强度，取3.64min处出峰，保留滤液，重复多次提取，得到波谱图上只有一个单峰，旋蒸干燥，得到固体YTX纯品。