[发明专利]石龟活性肽精制法及在预防肝硬化、抗疲劳中的应用

摘要

本发明公开了一种石龟活性肽精制法，先采用醋酸浸泡预处理，软化膨胀组织，去除部分杂蛋白，再采用酶解法并加入柠檬酸作为酶解介质，活性肽提取率在25％以上，而现有技术提取率在10％左右，且克服了传统炮制法耗时耗能，一般的酸水解法氨基酸受破坏，碱水解法易发生消旋作用等缺点，此外还结合多级膜分离技术，选择性高、副产物少、适应性强，分离出的活性肽纯度高于75％，分子量小于10KD，可以完整形式进入机体循环系统，易吸收，而常用的离心、沉降过滤法分子量分布不均一，吸收效果差。本发明经过酶解，微滤及多级超滤过程中同时完成了脱盐，脱苦，所制得的石龟活性肽颜色变浅，无异味，分子量趋于均一，安全无毒，在预防肝硬化，抗疲劳，增强免疫力等保健应用前景广阔。

主权项

1.石龟活性肽精制法，其特征在于，包括如下步骤：1)原料预处理：将石龟处死，去头，剔除内脏，洗涤3‑4次，粉碎，用醋酸调pH 2‑3，10℃以下浸泡24h，待膨胀均匀后取出，用水反复清洗2‑3次至无酸味，沥干，加水8‑10倍打浆，至匀浆液，加水补足失重；2)酶解：向步骤1)得到的匀浆液中加入1％柠檬酸作为酶解法提取介质，调节pH为3，加入2％的胃蛋白酶，4℃下酶解6h，每1h采用磁力搅拌机搅拌15min，加热，灭酶活，得石龟酶解液；3)多级膜分离纯化：①微滤：取步骤2)得到的石龟酶解液，加水稀释至质量分数为10％，用0.3μm膜微滤，操作压力为0.2MPa；②一级超滤：将步骤①得到的滤液通过20kD超滤膜超滤，操作压力0.2‑0.25MPa，超滤2‑3次；③二级超滤：将步骤②所得滤液再采用10kD超滤膜在0.8MPa操作压力下超滤2次，得到透过液，高压灭菌，减压浓缩干燥；④定期膜清洗：反应一段时间后，超滤膜有凝胶层，膜通量会降低，进行膜清洗，先用水冲洗15min，至透过液无色无味，加0.5％氢氧化钠反复冲洗15min，水洗至滤过液为中性；4)灭菌、干燥，得石龟活性肽粉末。