[发明专利]一种利用双向电泳体系获取罗非鱼肌肉蛋白质二维电泳图谱的方法

摘要

本发明公开了利用双向电泳体系获取罗非鱼肌肉蛋白质二维电泳图谱的方法，包括如下步骤：(1)双向电泳用可溶性罗非鱼蛋白质的制备；(2)检测双向电泳用可溶性罗非鱼蛋白质的浓度；(3)双向电泳，双向电泳包括等电聚焦电泳、胶条平衡、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺SDS-PAGE凝胶电泳；(4)凝胶染色，采用硝酸银染色法对SDS-PAGE凝胶进行染色；(5)图谱扫描，用扫描仪对凝胶进行扫描获得罗非鱼肌肉蛋白质的二维电泳图谱。本发明建立了一种易于操作、适于罗非鱼肌肉蛋白质的双向电泳体系以获得罗非鱼肌肉蛋白质的二维电泳图谱的方法，为后续罗非鱼肌肉蛋白质组学的研究奠定基础，也为其它鱼类肌肉蛋白质组学研究提供参考。

主权项

一种利用双向电泳体系获取罗非鱼肌肉蛋白质二维电泳图谱的方法，其特征是包括如下步骤：(1)双向电泳用可溶性罗非鱼蛋白质的制备选取罗非鱼肌肉组织，采用液氮研磨法研磨后，得粉末状组织，将粉末状组织用蛋白提取裂解液冰浴超声提取后，离心，取上清液，将上清液用丙酮沉淀、离心，收集蛋白沉淀，将蛋白沉淀用蛋白提取裂解液溶解后离心，取上清液即得双向电泳用可溶性罗非鱼蛋白质；(2)检测双向电泳用可溶性罗非鱼蛋白质的浓度采用Bradford法检测步骤(1)中获得的双向电泳用可溶性罗非鱼蛋白质的浓度；(3)双向电泳等电聚焦电泳：选取24cm、pH值为4～7的等电聚焦胶条，根据步骤(2)中的可溶性罗非鱼蛋白质的浓度，取一定体积的可溶性罗非鱼蛋白质至其质量为135～145μg，配制成上样液，将上样液置于等电聚焦仪进行等电聚焦电泳；胶条平衡：将等电聚焦电泳后的胶条置于平衡液中进行平衡；十二烷基硫酸钠‑聚丙烯酰胺SDS‑PAGE凝胶电泳：胶条平衡结束后，将其取出置于电泳缓冲液中浸泡，用含有溴酚蓝的低熔点琼脂糖溶液封胶，采用十二烷基硫酸钠‑聚丙烯酰胺分离胶进行SDS‑PAGE电泳；(4)凝胶染色采用硝酸银染色法对SDS‑PAGE凝胶进行染色；(5)图谱扫描用扫描仪对凝胶进行扫描获得罗非鱼肌肉蛋白质的二维电泳图谱。