[发明专利]检测人类IDH1基因突变的方法及其试剂盒

摘要

本发明公开了一种检测人类IDH1基因突变的方法及其试剂盒。该试剂盒包括IDH1 R132H反应混合液和IDH1内标反应混合液，该方法包括以下步骤：(1)在IDH1 R132H反应混合液中加入人类基因组DNA，形成R132H反应体系并进行荧光定量PCR扩增，还在IDH1内标反应混合液中加入从同一样品中提取的人类基因组DNA，形成内标反应体系并进行荧光定量PCR扩增；(2)对Ct值进行分析。本发明中的检测方法和试剂盒可以克服IDH1基因序列GC含量高、难以扩增等不利条件影响，对R132H位点突变实现有效的鉴别，检测灵敏度达到1％。

主权项

一种检测人类IDH1基因突变的荧光定量PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在IDH1R132H反应混合液中加入从样品中提取的、作为模板的人类基因组DNA，形成R132H反应体系并进行荧光定量PCR扩增，还在IDH1内标反应混合液中加入从同一样品中提取的、作为模板的人类基因组DNA，形成内标反应体系并进行荧光定量PCR扩增，其中：所述IDH1R132H反应混合液中包括：具有如序列表中SEQ ID No.1所示序列的IDH1R132H前向引物、具有如序列表中SEQ ID No.2所示序列的IDH1R132H反向引物和含有荧光染料的PCR预混液；所述IDH1内标反应混合液中包括：具有如序列表中SEQ ID No.3所示序列的IDH1内标前向引物、具有如序列表中SEQ ID No.4所示序列的IDH1内标反向引物和含有荧光染料的PCR预混液；(2)结果判断：首先确定人类基因组DNA在R132H反应体系进行荧光定量PCR扩增时的突变Ct值，然后确定同一样本在内标反应体系的Ct值，对Ct值进行分析。