[发明专利]一种奶牛乳腺上皮细胞永生化方法

摘要

本发明提供了一种奶牛乳腺上皮细胞永生化方法，其特征在于，在采用HPV E6和E7病毒感染原代奶牛乳腺上皮细胞使其永生化时，添加泛嗜性和兼嗜性病毒颗粒，从而增加病毒感染效率。本发明还提供了一种建立永生化奶牛乳腺上皮细胞系的方法，包括以下步骤：1)对奶牛乳腺组织在培养瓶中进行组织块原代培养；2)采用上述的病毒法感染原代奶牛乳腺上皮细胞，以使其永生化；3)筛选阳性克隆，进行细胞系的培养。使用这些方法可以高效率地对奶牛乳腺上皮细胞进行永生化，并且建立生长速度快和稳定连续传代的奶牛乳腺上皮细胞系，从而获得具有生理功能的奶牛乳腺上皮细胞，为奶牛乳腺上皮细胞的泌乳营养调控和奶牛乳房炎的发病机制研究提供实验细胞素材。

主权项

一种奶牛乳腺上皮细胞永生化方法，其特征在于，包括以下步骤：1)接种奶牛乳腺上皮细胞；2)待细胞生长至密度大约为50％‑70％时，弃上清液，用PBS清洗细胞；3)将泛嗜性和兼嗜性的HPV16E6和E7病毒液加入步骤2)中的奶牛乳腺上皮细胞中；4)将步骤3)中获得的混合液离心，留取上清液；5)将步骤4)中获得的上清液放置37℃、5％CO₂培养箱中孵育24h；6)吸弃步骤5)中获得混合液的上清液，加DMEM/F12培养基继续培养；7)待细胞密度汇合至70％‑80％时，用抗生素筛选阳性克隆。