[发明专利]一种仔猪心肌成纤维细胞的分离培养方法

摘要

本发明涉及一种猪心肌成纤维细胞分离方法，属于现代生物技术之细胞培养技术领域。包括：1）1~3日龄仔猪心脏组织采集，取心室组织剪碎，预冷PBS漂洗多次。2）心肌组织消化，0.25%胰蛋白酶和0.1%Ⅱ型胶原酶1：1混合37℃多次消化，加入DNA酶（0.02mg/mL）减少细胞悬液粘稠度，提高细胞获得率，并加入红细胞裂解液减少红细胞数量。3）仔猪心肌成纤维细胞培养，用含10~15%胎牛血清的DMEM高糖培养液重悬细胞，差速贴壁得到心肌成纤维细胞。本发明简单易掌握，节约时间，成功率高，获得的猪心肌成纤维细胞形态稳定、活性好、数量足。为以后以猪心肌成纤维细胞建立细胞模型研究心脏肥大等相关疾病奠定一定基础。

主权项

一种猪心肌成纤维细胞分离培养方法，其特征在于，包括如下步骤：1）心肌组织采样:无菌条件下取出仔猪心脏，放入盛有50 mL预冷PBS烧杯中；在无菌操作台，选取小猪心室，剔除心薄膜组织，用预冷PBS漂洗多次，把组织剪成苹果泥状；2）心肌组织消化:将剪碎组织转移到锥形瓶中，加入含DNA酶的混合酶液消化；3）移取上层清液，加入含10%~15% 胎牛血清的高糖DMEM培养液终止消化，用100 μ m和40 μ m滤筛分别过滤，如此重复，直至组织消化完全；4）收集细胞悬液后离心弃上清，加入红细胞裂解液，混匀离心，用含10%~15%胎牛血清DMEM高糖培养液重悬细胞；5）心肌成纤维细胞培养：将得到细胞转移至细胞培养瓶中，置于37 ℃、 5% CO₂细胞培养箱中进行差数贴壁；6）弃去上层清液，更换新的培养基继续在培养箱中培养。