[发明专利]一种对miRNA进行多重定量检测的方法在审
| 申请号： | 201510639411.X | 申请日： | 2015-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN105132577A | 公开（公告）日： | 2015-12-09 |
| 发明（设计）人： | 梁旺;王东;李宾 | 申请（专利权）人： | 基因科技（上海）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 陈静 |
| 地址： | 200241 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种对miRNA进行多重定量检测的方法。本发明所述的方法包括逆转录、单链互补延伸、S1核酸酶消化、固相吸附提取和荧光定量检测的步骤。本发明以荧光定量PCR为基础，结合应用了S1核酸酶的单链消化作用与核酸固相吸附提取技术，实现了miRNA定量检测的通量突破。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 mirna 进行 多重 定量 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种对miRNA进行多重定量检测的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)以待测miRNA为模板，以逆转录引物进行逆转录，从而获得逆转录产物；所述逆转录引物的5’端序列为通用序列1，3’端序列为与目标miRNA的3’端序列互补的特异结合序列；(2)以(1)获得的逆转录产物为模板，以互补引物进行单链互补延伸，从而获得单链互补延伸产物；所述互补引物的5’端为通用序列2，3’端为与目标miRNA的5’端序列相应的序列；(3)以S1核酸酶处理(2)获得的单链互补延伸产物，从而去除单链核酸；(4)对S1核酸酶处理后的体系进行固相吸附提取，从而获得纯化的双链DNA分子；(5)以上游通用引物和下游通用引物以及目标miRNA特异性探针对经过(4)处理的体系进行PCR荧光定量检测，从而确定miRNA的量；所述的上游通用引物和下游通用引物的序列具有与通用序列2和通用序列1的序列相应或互补的序列；所述的目标miRNA特异性探针具有目标miRNA或其片段的同义或反义序列。
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