[发明专利]体外诱导脂肪间充质干细胞向成熟肝细胞分化的方法

摘要

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及到一种体外诱导脂肪来源的间充质干细胞(ADSCs)向成熟肝细胞(iHeps)分化的方法。该方法包括的步骤为：分离出ADSCs；体外诱导培养ADSCs向iHeps分化，诱导分化过程分为3个阶段：内胚层诱导阶段；成肝诱导阶段；肝细胞的成熟阶段。使用本发明的诱导分化方法，只需要九天左右的时间就足够产生具有肝细胞形态，基因表达及功能的肝细胞，是目前用时最短的肝细胞分化方法。这将有利于临床治疗方案的应用。

主权项

1.体外诱导大鼠ADSCs向iHeps分化的方法，其特征包括以下步骤：a、从离体脂肪组织中分离出大鼠ADSCs；b、体外诱导培养ADSCs向iHeps分化，诱导分化过程分为以下3个阶段：内胚层诱导阶段：在步骤a分离得到的ADSCs中加入含有100nM IDE1和3μΜ CHIR99021的RPMI‑1640培养基中进行诱导培养，诱导时间为24小时；成肝诱导阶段：在完成内胚层诱导后的细胞中加入含有100nM IDE和20ng/mL FGF4的RPMI‑1640培养基诱导培养72小时；肝细胞的成熟阶段：在完成成肝诱导后的细胞中加入肝细胞生长因子(HGF)至150ng/mL、加入纤维母细胞生长因子4(FGF4)至20ng/mL、加入抑瘤素M(OsM)至30ng/mL、加入地塞米松(Dex)至2×10‑5mol/L以及加入ITS预混通用培养添加物的Williams’E培养基中诱导培养，培养时间为120小时。