[发明专利]一种利用白腐真菌粗酶液降解双酚A的方法

摘要

本发明公开了一种利用白腐真菌粗酶液降解双酚A的方法。制备白腐真菌粗酶液，加入酒石酸缓冲液，双酚A溶液，双氧水溶液和藜芦醇，控制反应体系的pH值为2.5～3，藜芦醇浓度为10mmol/L，温度保持在20～50℃条件下，反应30~50分钟，加入1.0~3.0mL甲醇终止反应，即实现利用白腐真菌粗酶液降解双酚A。本发明方法采用的是生物酶催化工艺，具有去除效率高，方便，安全无污染等突出特点；通过添加介体物质，能提高生物酶催化的反应效率，减少反应时间，从而降低酶的使用量，降低了运行成本。

主权项

1.一种利用白腐真菌粗酶液降解双酚A的方法，其特征在于具体步骤为：(1)制备培养基向三角瓶内加入10.0～20.0克的葡萄糖、1.0～2.0克吐温80、2.0～3.0克磷酸二氢钾、0.5～1.0克硫酸镁、1.0～2.0克氯化钙、0.001克维生素B1、0.5～2.0克氯化钠、0.2～1.0克硫酸锰和1.0～3.0mL微量元素混合溶液，定容至0.05～1.5升，在1.103MPa、121℃条件下灭菌20分钟，制得限氮液体培养基备用；(2)白腐真菌粗酶液的制备按照体积比为1:9量取孢子悬液和步骤(1)制得的限氮液体培养基，将孢子悬液接种于限氮液体培养基中，在25～40℃、100～200转/分钟的条件下置于振荡培养箱中悬浮培养5～7天，所得培养液在烧杯中缓缓研磨，破碎后得到的细胞匀浆培养液经冷冻离心机在4℃、8000转/分钟的条件下离心5～15分钟，取上清液，然后用无菌的0.45μm滤膜过滤，过滤后的滤液置于半透膜中，室温取流动水透析12小时，然后分子量10‑kDa超滤浓缩，得到的透析液即为白腐真菌粗酶液，置于4℃的冰箱中保存，备用；(3)双酚A的降解称取1.0～3.0mL浓度为250mmol/L的酒石酸缓冲液加入准备好的已灭菌的三角烧瓶中，然后置于30℃恒温水浴中，再加入1.0～3.0mL步骤(2)制得的白腐真菌粗酶液、5mL浓度为0.20mmol/L的双酚A溶液、0.5～2.0mL浓度为0.4mmol/L的双氧水和藜芦醇，控制反应体系的pH值为4，反应体系中藜芦醇浓度为10mmol/L，反应30～50分钟，加入1.0～3.0mL甲醇终止反应，即实现利用白腐真菌粗酶液降解双酚A。