[发明专利]中国人群肥胖易感基因SNP分型用试剂盒及其使用方法

摘要

本发明涉及一种中国人群肥胖易感基因SNP分型用试剂盒及其使用方法，具体公开了一种针对中国人群10个肥胖易感基因12个SNP位点的同时定性分型试剂盒及其使用方法，以FTO基因的2个位点，MC4R 基因的1个位点、ADRB3 基因的1个位点、PPARγ2基因的1个位点、LEPR 基因的1个位点、APOE 基因的2个位点，UCP2 基因的1个位点，GNPDA2 基因的1个位点，KCTD15基因的1个位点和NEGR1 基因的1个位点为检测对象，针对每个SNP位点的突变分别设计出扩增引物和延伸引物，并进行多重PCR扩增和标记延伸，通过毛细管电泳分析，同时获得12个SNP位点的基因型。本发明使用方便，操作简单，成本低，通量高，检测结果直接可靠，适用于中国人群肥胖易感基因SNP分型的大规模筛查。

主权项

一种中国人群肥胖易感基因SNP分型用试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括以下内容：（1）PCR反应试剂：包括10×PCR缓冲液、Mg²⁺离子、底物dNTP、Fast Taq酶，SNaPshot混合液；（2）按一定比例混合的针对10个肥胖易感基因11个区段进行多重PCR扩增的正向引物和反向引物；（3）按一定比例混合的针对10个肥胖易感基因12个SNP位点的PCR延伸引物；（4）PCR产物纯化试剂：包括核酸外切酶、虾‑碱性磷酸酶及其配套的缓冲液；（5）对照标本：包括单个SNP位点纯合、杂合突变的阳性对照标本、阴性对照标本；所述试剂盒以FTO基因 rs9939609位点和rs8050136位点、LEPR 基因rs1137100位点、APOE 基因rs429358位点和rs7412位点、MC4R 基因rs17782313位点、UCP2 基因rs660339位点、ADRB3 基因rs4994位点、PPARγ2基因 rs1801282位点、GNPDA2基因 rs10938397位点、KCTD15基因rs29941位点、NEGR1 基因rs3101336位点共12个位点为检测对象，针对每个SNP位点的突变分别设计出扩增引物和延伸引物，针对各个SNP位点进行多重PCR扩增和标记延伸，通过毛细管电泳分析，同时获得12个SNP位点的基因型；所述FTO基因rs9939609位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑CTGGCTCTTGAATGAAATAGGA‑3’和5’‑GTCACACTCAGCCTCTCTACCA‑3’；所述FTO基因rs8050136位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑TGTGACAGTGCCAGCTTCAT‑3’和5’‑CACCAAGATGGTCATGTCTGAT‑3’；所述LEPR基因rs1137100位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑TTGCCTGCTGGACTCTCAA‑3’和5’‑AGAGATATTCCTTGCCTGAAGA‑3’；所述APOE 基因rs429358位点扩增的正向引物和反向引物与所述APOE 基因rs7412位点扩增的正向引物和反向引物相同，均是5’‑CTGATGGACGAGACCATGAAG‑3’和5’‑TCGGCGTTCAGTGATTGTC‑3’；所述MC4R基因rs17782313位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑AGGCTCTGCTCTGTGTCTCTT‑3’和5’‑CTTCTGGAGGCAGGTTCTGT‑3’；所述UCP2 基因rs660339位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑CATCGCAGATCTCATCACCT‑3’和5’‑TGCTCCATACTCACGCTCAG‑3’；所述ADRB3基因rs4994位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑CTCTCATGCCTTGCTGTC‑3’和5’‑GGTTGGTCACAGCCAGGTA‑3’；所述PPARγ2基因rs1801282位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑GACAGTGCCAGCCAATTCA‑3’和5’‑TGAACGCGATAGCAACGAG‑3’；所述GNPDA2基因 rs10938397位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑TCTGTGCAGAGATGGCTGAT‑3’和5’‑GTGGTGATTCCACTGGCATA‑3’；所述KCTD15基因rs29941位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑TCATGCCTGGATGCACAAC‑3’和5’‑GATCTCACAACCAGCGAGTTC‑3’；所述NEGR1 基因rs3101336位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑CCACGTAAAAGCCTGTCAGA‑3’和5’‑TGACCAGGGATGGAGCTATG‑3’；所述FTO基因rs9939609位点的延伸引物是(T)₁₃AGAGACTATCCAAGTGCATCAC；所述FTO基因rs8050136位点的延伸引物是(T)₂₂TTGCCCACTGTGGCAAT；所述LEPR基因rs1137100位点的延伸引物是(T)₂₃TGCAGACAACATTGAAGGAA；所述APOE 基因rs429358位点的延伸引物是(T)₃₀CGGACATGGAGGACGTG；所述APOE 基因rs7412位点的延伸引物序列是(T)₃₄CCGATGACCTGCAGAAG；所述MC4R基因rs17782313位点的延伸引物是(T)₃₃TAAAGCAGGAGAGATTGTATCC；所述UCP2 基因rs660339位点的延伸引物是(T)₄₃CCAGTGCGCGCTACAG；所述ADRB3基因rs4994位点的延伸引物是(T)₄₄GTCTGGAGTCTCGGAGTCC；所述PPARγ2基因rs1801282位点的延伸引物是(T)₄₆CTGGGAGATTCTCCTATTGAC；所述GNPDA2基因 rs10938397位点的延伸引物是(T)₄₉TGCTAAGAACATTCTTGAAAAC；所述KCTD15基因rs29941位点的延伸引物是(T)₅₅TGACCTCTGCAGACCTAGGA；所述NEGR1 基因rs3101336位点的延伸引物是(T)₅₆AAGAAAGCAATGACTGAACTTAG。