[发明专利]一种新型内切型褐藻胶裂解酶基因及工程菌和应用

摘要

本发明公开了一种重组褐藻胶裂解酶及其工程菌和水解制备褐藻寡糖的方法，根据从海藻中新分离菌株Vibrio sp.BZM-1，筛选得到褐藻胶裂解酶基因—AlgM；构建含有该基因的表达载体pHBM905BDM-AlgM，转化毕赤酵母GS115感受态细胞，获得单拷贝基因工程菌；构建培养验证多拷贝的基因工程菌，高效表达制备重组褐藻胶裂解酶，并用该酶水解海藻酸钠生产褐藻寡糖。含四个拷贝的重组褐藻胶裂解酶基因工程菌GS115/AlgM4(CCTCC No：M2015500)表达水平较高。本发明重组褐藻胶裂解酶活性高达31000U/mL。

主权项

内切型褐藻胶裂解酶AlgM的基因序列，其特征在于：(1)、根据从海藻中新分离的菌株Vibrio sp.BZM‑1，建立该菌的基因组文库，筛选得到褐藻胶裂解酶基因—AlgM；并进行序列测定，该基因的GenBank登录号为KM655840，该基因编码545个氨基酸，核心序列编码521个氨基酸；(2)、根据核心序列设计引物：在引物的5’端分别加上接头GTCA和GGCCA，引物序列为：AlgM‑F：GTCAATGAAACATAAAATCGTCAAAACATTAAlgM‑R：GGCCATTATTTACCTTGATAGGTGCCGTG；并通过PCR扩增所述褐藻胶裂解酶基因：扩增条件为94℃3min，94℃30s，55℃30s，72℃1min，共30个循环，最后72℃3min。