[发明专利]一种鸡白细胞抗菌肽的制备方法

摘要

本发明公开了一种鸡白细胞抗菌肽的制备方法，它包括以下具体步骤：（1）鸡白细胞的采集；（3）萃取（4）脱酸；（4）抗菌肽的纯化。本发明方法实现了从鸡白细胞提取具有较强抗菌活性的多肽物质，为生产抗菌肽提供了一个新的途径和方法。本发明方法具有操作简单、分离提取率高、成本低的特点，适用于较大量的从鸡血中分离纯化抗菌肽。

主权项

一种鸡白细胞抗菌肽的制备方法，其特征在于：它包括以下具体步骤：（1）鸡白细胞的采集：每只鸡腹腔内注入0.5g/L酪蛋白生理盐水200 mL,6~8 h后,放血处死,收集富含白细胞的腹水,肝素抗凝,，经6层纱布过滤除去杂质,2 000 r/min离心15 min,弃上清液,收集白细胞,PBSX液洗涤2次后,用冷却的去离子水裂解残留红细胞,镜检,至无红细胞为止；（2）萃取：将白细胞中加入10％的醋酸，用料理机进行搅打破碎，60 Hz超声波破碎细胞4×60 s后染色镜检白细胞是否破碎，若未破碎，重复进行破碎，至镜检无完整细胞；4℃、 15000 r/min离心20min，收集上清液即为异嗜性粒细胞胞浆内的颗粒组份；4℃下搅拌过夜，萃取得醋酸提取物；（3）脱酸：将以上方法萃取得到的醋酸提取物，经4℃、 15000 r/min离心20mi，收集上清液，旋转蒸发除去醋酸和部分水分后，真空冷冻干燥得抗菌肽粗品，密封包装后在‑20℃保存；（4）抗菌肽的纯化：将冻干抗菌肽粗品用0.5%甲醇溶解,再上样于层析柱，同时打开柱的下端出口，收集特征峰洗脱液再真空冷冻干燥得抗菌肽，‑20℃保存。