[发明专利]一种经济有效的细菌细胞破碎方法

摘要

本发明公开了一种经济且快速有效的细菌细胞破碎方法。此种方法采用液氮冷冻与30℃恒温水浴融化技术，从而达到细菌细胞破碎的目的，适用于大多对温度变化不敏感的蛋白质的分离纯化前期细胞破碎处理。此法能够在较短时间内获得大量的细菌细胞破碎液，为蛋白质的进一步分离提纯奠定良好的基础。现有已知方法使用大型仪器如细胞破碎仪、超声波破碎仪或-80℃低温冰箱等对细菌细胞进行破碎，具有投资成本高，劳动成本高，技术难于掌握，耗时长，效果较差等弊端问题；而此法所使用的细菌细胞破碎设备不涉及大型仪器，实验室仅需具备液氮和液氮罐即可完成操作，可有效地规避现有已知方法破碎细胞带来的上述诸多弊端问题。

主权项

一种经济有效的细菌细胞破碎方法，其特征按下列步骤进行：（1）收集细胞细菌细胞沉淀物：将待破碎的细菌细胞培养液均分为N份分装于N个相等型号的EP管中（事先洗净灭菌），放于4℃低温高速离心机中，对称平衡，8000 rpm‑16000 rpm离心1‑5 min，去除上清液，收集细胞沉淀物；（2）溶菌酶处理：每管中分别加入适量溶液A（3.0 mM 咪唑，0.5 M NaCl，20 mM Tris‑HCl，pH=7.9），使细胞体充分重悬后，各加入溶菌酶 (50 mg/mL) 充分混合，至终浓度为1 mg/mL ‑2 mg/Ml，冰浴0.5 h‑1 h，或4℃过夜；（3）反复冻融：将上述EP管放在液氮中，迅速使其凝固，待其完全凝固后，取出EP管放在30℃水浴锅中，使其充分溶解，且注意溶解时要不断摇晃EP管，避免EP管管壁温度太高，而使蛋白质高温变性；（4）重复步骤 (3)，使细胞反复冻融5‑7次；待溶液呈粘稠状时，停止冻融；根据所需提取的内含物的性质不同，对上述细胞破碎液进行不同处理，如需获得蛋白提取液，下一步可对此溶液进行离心处理，去除沉淀。