[发明专利]一种使用家蚕制备镇痛多肽的方法

摘要

本发明公开了一种使用家蚕制备镇痛活性多肽的方法，属于基因工程领域。所述制备方法如下：根据家蚕核型多角体病毒（BmNPV）密码子使用频率优化芋螺毒素ω‑MVIIA基因序列，经化学合成后连入供体质粒pFastBacDual，再引入绿色荧光蛋白（EGFP）基因，构建重组供体质粒pFBD‑MVIIA/EGFP。使用Bac‑to‑Bac方法将MVIIA/EGFP转座到BmNPV，形成重组病毒vBm^MVIIA/EGFP。将重组病毒DNA转染至家蚕细胞，获得BV粒子，借助绿色荧光测定BV粒子滴度后，以200 pfu的BV粒子注射家蚕，感染5天后，收获家蚕血液。通过小鼠醋酸扭体试验证实，表达芋螺毒素ω‑MVIIA的受感染家蚕的血液具有显著的镇痛活性，平均扭体次数仅3.55次，明显高于注射生理盐水的对照组（37.30次）。本发明为表达具有镇痛活性的芋螺毒素ω‑MVIIA提供了新的方法，具有潜在的应用价值。

主权项

1.一种使用家蚕制备镇痛活性多肽的制备方法，其特征在于，具体操作包含以下步骤：（1）根据BmNPV密码子使用频率优化芋螺毒素ω‑MVIIA基因序列，经密码子优化的ω‑MVIIA基因的序列为SEQ ID NO.1，其编码的ω‑MVIIA前体蛋白序列为SEQ ID NO.2；（2）导入EGFP基因，构建重组供体质粒pFBD‑MVIIA/EGFP；（3）筛选含有ω‑MVIIA基因的重组BmNPV病毒vBmMVIIA/EGFP，即重组芋螺毒素ω‑MVIIA。