[发明专利]一种半夏试管微球茎的制备方法

摘要

本发明公开了一种高效生产半夏试管微球茎的方法，本发明中半夏试管微球茎是指在组织培养条件下，以半夏块茎经过诱导出愈伤组织，脱去主要病毒，再用愈伤组织诱导出半夏组培芽，在通过控制培养基成分和培养条件及环境温度，诱导试管苗形成微球茎。该方法繁殖速度快，生产效率高，生产成本低，能周年工厂化生产；生产出来的试管微球茎具有无病毒、体积小、贮藏运输方便特点，是一项具有产业前景，能从根本上解决半夏退化的先进方法。

主权项

一种试管微球茎的制备方法，其特征在于包括如下操作步骤：1）.将半夏块茎接入培养基中诱导出愈伤组织后，进行继代增殖、芽的分化；2）.当经过诱导出的半夏组培芽长到有1～3 cm长时，选取生长良好的芽，从愈伤组织处切下，使其带有一块愈伤组织，愈伤组织直径3±1 mm，将半夏组培芽接入到诱导培养基中，芽留在培养基外面，诱导培养基的6‑糖基氨基嘌呤KT浓度为 0.8 mg/L、萘乙酸NAA浓度为 0.8 mg/L、糖浓度为3 %， 诱导培养基的肌醇浓度提高到500 mg/L，放入光照条件12 h/d，光照时间为12 h/d，温度为23—27℃左右的培养室中培养；3）.将带有愈伤组织的幼芽接入到培养基中后，在前10 d愈伤组织继续增大，幼芽也迅速增长，在10—20 d中从愈伤组织上不断长出不定根，且愈伤组织不在增殖，表面变得平滑，有绿色的亮泽出现，在20—30 d中植株不断成熟，同时，愈伤组织完全变成与半夏块茎外形、结构相似的幼小球茎；4）、将诱导出与半夏块茎外形相似的幼小球茎从培养基中取出洗净，将微球茎以上的半夏苗切除，保留球茎部分，并将获取的半夏微球放入到质量浓度为0.5%的高锰酸钾溶液中进行消毒5—8min，然后放入到活性炭: 滑石粉: 多菌灵比例为3:1:0.02的粉末中滚动3‑5min，再喷洒6‑糖基氨基嘌呤KT浓度为 0.1 mg/L、萘乙酸NAA浓度为 0.1mg/L、赤霉素GA3浓度为 0.1mg/L的1/2MS培养溶液，之后重复上述步骤2操作，放入5%的褐藻酸钠溶液中侵泡5—7min取出置于空气中固化10‑15min，再将已固化的半夏微球放入0.4%氯化钙溶液中侵泡1‑2min取出置于空气中固化后，即可用透气性良好的聚乙烯塑料袋包装、贮藏。