[发明专利]一种盐穗木金属硫蛋白发酵工艺及其应用

摘要

本发明提供一种盐穗木金属硫蛋白的发酵工艺及其应用，将现有技术中重组表达转化体在37℃培养过夜，以2%的比例接种到改良后的发酵培养基，在全自动发酵罐进行发酵，装液系数0.5，添加消泡剂后整体灭菌，通气量为1 L/min，保持温度37℃、搅拌转速100r/min，发酵4 h后加入浓度为6mmol/L乳糖进行诱导，继续发酵4h后将发酵液以8000rpm离心10min得到菌体，再用PBS洗涤离心三次，105℃干燥1.5h后恒重称量盐穗木金属硫蛋白的菌体干重，所得菌体量比摇瓶培养提高了31%，本发明能够大幅度提高盐穗木金属硫蛋白的产量，并适于工业化大规模生产，对金属硫蛋白应用领域具有广泛意义。

主权项

1.一种盐穗木金属硫蛋白的发酵工艺，其特征在于，具体发酵工艺步骤如下：将现有技术中获得的重组表达转化体大肠杆菌E.coli BL21（DE3）在37℃培养过夜，再以 2% 的比例接种到改良后的发酵培养基，在全自动发酵罐进行发酵，装液系数为 0.5，添加消泡剂后整体灭菌，通气量设为 1 L/min，保持温度 37℃、搅拌转速100r/min，发酵4 h后，加入浓度为6mmol/L 乳糖进行诱导，继续发酵4h后，将发酵液以8000rpm离心10min得到菌体，再用 PBS 洗涤离心三次，105℃干燥 1.5h 后恒重称量制备获得盐穗木金属硫蛋白的菌体干重，其中发酵培养基按重量计包括两部分 ：一部分为 900 mL 的培养基，含有 4g蔗糖，24g 酵母浸粉，8g 蛋白胨；另一部分为100mL 的磷酸缓冲液，其中含有 2.31g KH2PO4，12.54g K2HPO4·3H2O，将两部分分别高压灭菌后混合配制 1L 的改良培养基，所述重组表达转化体大肠杆菌E.coli BL21（DE3）能表达序列表SEQ ID NO.2所示的盐穗木金属硫蛋白。